[发明专利]一种基于质谱的N-糖链相对定量的方法

权利要求书

1.一种基于质谱的N-糖链相对定量的方法，其特征在于，该方法为苯胺功能化的DOTA(S-2-(4-氨基苄基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷四乙酸)标记N-糖链再螯合稀土金属离子的相对定量的方法，其中，选用苯胺功能化的DOTA对糖链进行衍生，然后在利用DOTA与不同的稀土金属离子Ho³⁺/Lu³⁺螯合实现质量差标签的引入，从而实现相对定量；

其包括步骤：

(1)在糖链的冻干样品中，按顺序加入苯胺功能化的DOTA，还原剂氰基硼氢化钠混合，反应结束后冻干样品；

(2)分别向标记上DOTA的糖链中加入LuCl₃或者HoCl₃，反应完后混合除盐；

(3)进行MALDI质谱分析；

所述的方法中，苯胺功能化的DOTA与糖链的反应中，苯胺功能化的DOTA与糖链先在37℃孵育1小时后，再加入还原剂氰基硼氢化钠进行还原胺化反应，反应温度为37℃，反应时间为2小时，还原剂氰基硼氢化钠的终浓度是5mg/ml，反应体系为甲醇溶液(乙酸/甲醇：v/v15:85)，总体系为50μL；

所述的方法中，DOTA标记的糖链与稀土金属盐LuCl₃或者HoCl₃的螯合反应中，利用DOTA与稀土金属离子Ho³⁺/Lu³⁺强的螯合作用，反应温度是37℃，反应时间是1小时，DOTA与金属盐的摩尔比是1:10，反应体系是10mM NH₄AC,pH 5.6；

所述的方法中，将标记上DOTA-Lu和DOTA-Ho的糖链混合中，开始的糖链衍生DOTA分别进行衍生，衍生DOTA后，其中一份螯合金属离子Ho³⁺，其中一份螯合金属离子Lu³⁺，衍生金属离子后再混合除盐。

2.按权利要求1所述的基于质谱的N-糖链相对定量的方法，其特征在于，所述除盐，其中包括：预洗：将PGC tip头在乙腈中反复吹20次进行活化；平衡：将PGC tip头在超纯水中反复吹打20次；上样：用PGC tip头反复吹打样品20次；清洗：将PGC tip头在超纯水中反复吹打20次；洗脱：PGC tip头在洗脱液(乙腈/水：v/v 3:7，含0.05％TFA)中反复吹打40次。