[发明专利]一种胶原蛋白‑硫酸乙酰肝素复合敷料的制备方法

权利要求书

1.一种胶原蛋白-硫酸乙酰肝素复合敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)、制备6～18mg/mL的胶原溶液，连续搅拌12h以上；

2)、将搅拌均匀的胶原溶液装入离心杯中，离心，脱泡，然后灌注到模盒中，并冷冻干燥，得到胶原海绵；

3)、将冷冻干燥后的胶原海绵于110～125℃真空热交联48～72h；

4)、配置0.5～10mM的EDC/NHS交联液，并添加胶原海绵质量的10～20％的硫酸乙酰肝素，搅拌溶解，放入胶原海绵二次交联12～36h；

5)、弃交联液，将胶原海绵先用注射水冲洗2～3遍，再置于注射水中清洗，每100片需15L～25L注射水，每隔3～4h更换一次注射用水，更换6～8次；

6)、将清洗完毕后的胶原海绵置于模盒中，铺平整，并注入20～35mL注射水，使注射水浸润海绵上表面，放入冻干机中，二次冻干；

7)、将二次冻干的海绵放入真空干燥箱内进行干燥；

8)、将冻干后胶原海绵装入灭菌复合袋中，依次排列于压制机板层中，压制5～10min后，即可制得胶原蛋白-硫酸乙酰肝素复合敷料，装入灭菌复合袋中，辐照灭菌。

2.如权利要求1所述的胶原蛋白-硫酸乙酰肝素复合敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中胶原溶液的制备方法包括以下步骤：

(1)取新鲜动物组织，切割清除油脂层和毛皮层，去除杂质，清洗，将组织破碎成小颗粒状，按照固液比1:30～1:40的比例，加入0.01～0.03mol/L的氢氧化钠水溶液，于6～8℃浸泡1～2小时，过滤，备用；

(2)在上述预处理后的组织中加入质量为组织质量6～8倍的无水乙醚或者丙酮，于35～40℃回流5～8小时，之后用蒸馏水冲洗至无异味，备用；

(3)将上述组织浸入0.6～0.7mol/L冰醋酸和600～700mg/L胃蛋白酶的混合液中，持续搅拌25～30小时；

(4)对上述混合物采用渐进式超声波处理，先使用100～200W超声处理30分钟，再使用200～300W超声处理30分钟，最后使用300～400W超声处理1小时；

(5)加入2～3％的H₂O₂溶液，混合静置2～4小时，调节pH至5.0，离心；

(6)取上清液，加入NaCl，搅拌20～30小时，离心，沉淀物加入0.6～0.7moL/L冰醋酸溶解，离心，取上清液，调节pH至7.5，加入NaCl，搅拌20～30小时，离心；

(7)将步骤(6)得到的沉淀物溶解于0.6～0.7moL/L冰醋酸，先以0.6～0.7moL/L的冰醋酸为透析外液透析2次，每次4小时，再以蒸馏水为透析外液透析5～7次，每次4小时，至外液检测不到氯离子，得到胶原液体。

3.如权利要求1所述的胶原蛋白-硫酸乙酰肝素复合敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中灌注到模盒中的胶原溶液充满整个模盒，胶原液外观应平整、均一，不得有气泡。

4.如权利要求1所述的胶原蛋白-硫酸乙酰肝素复合敷料的制备方法，其特征在于，所述步骤7)中干燥的方法为，将真空干燥箱抽真空至90Kpa以上，并保持1h以上，升温至80℃后恒温2h以上，然后升温至100～125℃，恒温6～12h。