[发明专利]端粒长度检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种端粒长度的检测方法，其特征在于：采用液相双链探针核酸分子杂交方法检测端粒DNA相对长度。

2.一种端粒长度的检测方法，其特征在于：根据人类端粒DNA序列设计合成一对特殊标记的人端粒DNA特异的双链荧光探针，使过量的双链荧光探针与一定量的待测DNA混合于杂交缓冲液中，通过加热升温变性与降温杂交使探针与靶DNA特异结合并发出荧光，多余的探针杂交成双链不发荧光；再通过检测杂交前后的荧光值，计算荧光变化值，换算成单位待测DNA对应的荧光变化量，即用杂交前后分别检测荧光值除以杂交用DNA的量表示端粒DNA的相对长度。

3.根据权利要求2所述的端粒长度的检测方法，其特征在于：所述双链荧光探针的两条荧光探针长度15-24nt，序列互补，而且标记的荧光基团及标记位置不同，一条于5’端标记FAM荧光素，另一条于3’端标记TAMRA淬灭基团，并使两条探针杂交结合成双链。

4.根据权利要求2或3所述的端粒长度的检测方法，其特征在于：所述双链荧光探针的序列及标记为：

5'.FAM-GGGTTAGGGTTAGGG-3'

3'.TAMRA-CCC AATCCC AATCCC-5'。

5.根据权利要求2所述的端粒长度的检测方法，其特征在于：所述加热升温变性的温度为98℃，降温杂交的温度为45℃-65℃。

6.一种端粒长度的检测方法，其特征在于：包括

（1）首先根据人类端粒DNA序列设计合成一对特殊标记的人端粒DNA特异的荧光探针，并使其结合成双链，双链荧光探针的序列及标记为：

5'.FAM-GGGTTAGGGTTAGGG-3'

3'.TAMRA-CCC AATCCC AATCCC-5'；

（2）取待测受试者外周静脉血3-5ml于枸橼酸钠盐抗凝采血管中，提取其DNA，溶解于TE缓冲液中，得混合液A，并测定混合液A中DNA的浓度；

（3）将双链荧光探针混于核酸杂交缓冲液中，得混合液B；

（4）取含有10μg DNA的混合液A加入到含有50μL混合液B的试管中，其中，50μL混合液B中含有1μM双链荧光探针，并记录其荧光值；然后加热到98℃变性DNA与双链荧光探针，再迅速降温至50℃使双链荧光探针与端粒DNA竞争性分子杂交，杂交完全后再次测定其荧光值，计算杂交前后荧光值的变化量与用于杂交的DNA的量的比值表示端粒DNA的相对长度。

7.一种端粒长度的检测试剂盒，其中包括：

双链荧光探针；所述双链荧光探针的两条荧光探针长度15-24nt，序列互补，标记的荧光基团一条于5’端标记FAM荧光素，另一条于3’端标记TAMRA淬灭基团，两条探针杂交结合成双链；所述双链荧光探针的序列及标记为：

5'.FAM-GGGTTAGGGTTAGGG-3'

3'.TAMRA-CCC AATCCC AATCCC-5'；以及

杂交缓冲液。