[发明专利]一种规模化稳定培育桑黄菌种的方法

说明书

本发明属于桑黄菌种培育技术领域，提供了一种规模化稳定培育桑黄菌种的方法。该方法通过将沸石粉与硅藻土复合后高温灭菌，利用液氮快速冷却至一定温度，在无菌室将桑黄菌种接入沸石粉与硅藻土的复合体上。然后用水、桑树锯木屑、碳源、氮源、磷肥、钾肥、硫酸镁及琼脂粉预制培养基，并采用高压蒸汽灭菌。再将接种了桑黄菌的复合体与营养基按比例混合后装入网格板，用塑料封装，放入培养室内，控制培养室的温度和相对湿度，并保持黑暗状态，培养一定时间后即可得到均匀的菌丝。与传统方法相比，该发明的方法培育桑黄菌种，成活率高，质量稳定，可实现规模化培育。

技术领域

本发明涉及桑黄菌种培育技术领域，尤其是涉及一种规模化稳定培育桑黄菌种的方法。

背景技术

桑黄是一种珍贵的药用真菌，被誉为“森林黄金”。其子实体入药，可治血崩、血淋和闭经等妇科疾病，其抗癌、抗菌、抗氧化及抗纤维化效果也很显著，因此近几年成为研究热点。日本和韩国对桑黄的研究较多且较深入。由于野生桑黄对生长环境条件要求无比严苛，且需20~30年的生长周期，故其极其难得，供不应求，价格非常昂贵。因而，人工培育可作为药品原料的桑黄具有很大的必要性。对桑黄菌种的分离与培育是人工培育桑黄的第一步，显得尤为重要。我国在这方面的研究才处于起步阶段，已有一些研究者制备出了含各种营养成分的桑黄菌种培养基，但得到的菌种成活率不高，质量不够稳定。

Gao等发明了一种桑黄菌种的培育方法，制备的培养基质量配比组成为：杨树或柳树或桑树木屑75～85％、麸皮10～15％、米糠5～8％、石膏1～2％、磷酸二氢钾0.2～0.5％、硫酸镁0.1～0.3％，所培育的桑黄菌种发菌快，表面菌丝不易老化，培养30～35d即可全部发满，产出的桑黄个体大，操作简单，可实现大量人工栽培。Wang等先制备培养基，然后在无菌环境下，用接种工具取桑黄菌种块，移入试管培养基中部，塞上棉子，再将接种后的试管移至恒温培养箱中，在暗室中，25～35℃下恒温培养10～15d，可使菌种生长旺盛，生长速度快，可大规模发酵生产菌丝体和提取活性成分。Zhang等通过将桑黄母种接种到固态培养基中避光培养，然后将固态培养基中菌种接种到液体培养基中培养，获得桑黄液体种。固态培养基所含组分及质量分数为：桑木屑20%～30%、柞木屑40%～50%、麦麸20%～27%、红糖1%～1.5%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.1%、石膏粉1～1.5%，含水率为60%～63%。该方法能使桑黄菌种生长速度提高达30%～40%，出黄率提高达20%，且子实体质量好、污染小、可重复实现。Zhu等采用杭白菊75～85份、麸皮10～20份、玉米粉2～10份、蔗糖0.5～1.5份，并加入等质量的水，制备了培养基。将桑黄菌种接种于上述培养基进行培养，获得了桑黄菌丝体，解决了桑黄人工培养技术耗时长，成本高，产量低，售价高的缺点。Wang还研究了一种桑黄菌种的液体培养基制备方法及发酵方法，采用葡萄糖为10～25g/L、豆饼粉为30～50g/L、KH₂PO₄为1～5g/L、MgSO₄为1～2g/L，适宜pH为5.5～6.5。该方法的培养基成分简单，配方和配比合理，能促进菌丝生长发育，提高菌株活性，从而提高菌丝体产量，干菌丝体产量可达13.5g/L以上。

采用上述培养基培育桑黄菌体的方法，都在培育出桑黄菌体方面取得了一定成效，但在菌种成活率及质量的稳定性上存在普遍缺陷，一个重要原因是菌种在培养基中难以均匀分布，其对培养基中的营养吸收也不均匀，局部会被培养基催熟，使其老化，甚至死亡，这明显降低了桑黄菌种的生产效率及产品质量，影响桑黄的药用价值。针对这种情况，本发明旨在采用预先接种的方法，促使桑黄菌种在培养基中能稳定均匀分散，同时注重培养基的营养组成及配比，保证桑黄菌种能从培养基中吸收到充足、均衡、稳定的营养，从而提高其成活率及质量稳定性，实现规模化稳定培育。

发明内容

在本发明的目的是提供一种规模化稳定培育桑黄菌种的方法，可以解决传统方法成活率低，质量不稳定的缺点，最主要的，创造性的应用沸石粉与硅藻土的复合体预先接种菌种，为菌种在培养基中的均匀分布和均匀吸收营养提供了保障。

本发明涉及的具体技术方案如下：