[发明专利]扎那米韦-磁纳米粒子缀合物、其制备方法及用途

说明书

本发明涉及一种扎那米韦‑磁纳米粒子缀合物、其制备方法及其在对流感病毒、该病毒的NA蛋白和RNA进行检测方面的用途。本发明的扎那米韦‑磁纳米粒子缀合物能够对浓度较低且成分复杂的样品中几乎全部类型的流感病毒和/或NA蛋白进行富集、分离和/或纯化，使得对流感病毒、该病毒的NA蛋白或RNA的提取和/或检测更加简便快捷。

技术领域

本发明涉及生物材料领域，具体涉及扎那米韦-磁纳米粒子缀合物及其制备方法，以及该缀合物在对流感病毒、流感病毒的NA蛋白或RNA进行检测方面的用途。

背景技术

流行性感冒(流感)是由流感病毒引起的人畜共患传染病，其宿主涉及人、猪、鸟、马和海豚等动物。流感病毒变异快、传播性高、危害性大。除造成季节性流感外，流感病毒的每次大规模流行都给人类社会造成重大损失。例如，1918年西班牙流感导致近2000万人死亡，1957年亚洲流感和1968年香港流感分别导致200万和150万人死亡。近年来，由于病毒的新变异毒株及耐药性的出现、人畜间跨种传播、全球人口流动性增强等原因，流感的大规模爆发呈上升趋势。2009年甲型H1N1病毒的全球性爆发和高致病性禽流感H5N1病毒的散在性爆发、2013年我国爆发的人感染禽H7N9新型流感病毒均造成巨大损失。因此，仍存在对流感病毒防控研究的迫切需求。在这方面，如果能在第一时间鉴定和明确流感病毒及种类，并提供病毒来源和相关特征，将有助于快速评估病毒的传播风险和健康危害，并为疫情的及时有效控制提供支持。

然而，到目前为止，标准化最为完善的流感病毒分离鉴定方法涉及利用细胞、鸡胚或实验动物扩增病毒，并进行一系列的分离鉴定。整个过程至少需要两周，耗时耗力。最近10年发展的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)是目前最为常用的检测流感病毒遗传物质的分子生物学技术。该方法的关键步骤在于提取并纯化流感病毒的RNA。然而，由于临床样品中病毒浓度较低且存在大量的抑制PCR反应的物质，需要除去这些抑制物并浓缩病毒RNA才可能得到可靠的检测结果。虽然市面上存在各种RNA提取试剂盒，然而，这些试剂盒大都存在操作繁琐、条件苛刻、耗时长、依赖离心机等大型设备的缺陷。另一方面，酶联免疫吸附(ELISA)是目前检测流感病毒特异性蛋白的最为常用的方法。然而，该方法的反应灵敏度和结果稳定性极大依赖于反应温度和pH，检测灵敏度较低。此外，实际的待测样品远比实验室样品复杂。在干扰物质多且流感病毒含量极低的情况下，ELISA方法的检测能力大为降低。

事实上，在对病毒含量极低的复杂样品进行检测时，对流感病毒或其RNA、蛋白的富集分离极为重要。在这方面，磁纳米粒子因具有如下优点而被广泛用于富集分离：(1)比表面积较高，容易结合更多的靶标；(2)粒径均一，单分散；(3)具有超顺磁性，操作方便，省时省力。在利用磁纳米粒子实施富集分离步骤的检测方法中，常在磁纳米粒子表面修饰抗体，该抗体针对分布于流感病毒表面囊膜上的蛋白(例如针对血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)或M2)，因此能够通过抗原-抗体特异性相互作用实现流感病毒的抓取和富集，以便于后续的分离纯化。然而，由于抗体价格昂贵且容易变性，制备的抗体-磁纳米粒子成本高昂且不易保存，即便回收也难以重复利用。另一方面，由于抗体的特异性过强，即便同一亚型流感病毒的不同毒株也需要单独实施富集分离。而对于未知亚型的新型突变株，由于针对性抗体的制备周期长，上述方法的适用性存在很大局限性。本领域仍存在探索新的流感病毒磁分离技术的需求。

发明内容

针对本领域的上述需求，在第一方面，本发明提供了一种扎那米韦-磁纳米粒子缀合物，该缀合物具有式X-1的结构：

其中，所述Fe₃O₄@COOH表示磁纳米粒子部分，所述Fe₃O₄@COOH为由在外表面上具有羧基的聚合物包裹的Fe₃O₄磁纳米粒子；所述Ac为乙酰基；所述m为0-12的整数；所述n为0-11的整数；所述p为1-800,000的整数。

在第二方面，本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含第一方面所述的扎那米韦-磁纳米粒子缀合物。