[发明专利]一种可对活细胞内microRNA21进行原位成像的纳米放大自参比探针

权利要求书

1.一种可对活细胞内microRNA21进行原位成像的纳米放大自参比探针，其特征为，将核酸修饰的上转换纳米粒子UNP-H1和荧光染料修饰的发卡分子H2-F两个组分通过脂质体包裹形成所述纳米放大自参比探针，H1与H2为催化杂交组装发卡对，只有当H1被待测microRNA21打开后才能与H2杂交并释放出microRNA21，UNP为具有多波长发射能力的羧基修饰的上转化纳米粒子，H1的序列为5’-NH₂-TCAACATCAGTCTGATAAGCTACCATGTGTAGATAGCTTATCAGACT，H2-F为TAAGCTATCTACACATGGTAGCTTATCAGACTCCATGTGTAGA-F-3’，H1的5’端修饰有氨基，可共价连接UNP表面的羧基，H2的3’端修饰荧光分子F，F的吸收峰与UNP的任一发射峰重叠。

2.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，探针进入细胞后，释放UNP-H1和H2-F，只有当待测microRNA21存在时，UNP-H1和H2-F才会杂交生成UNP-H1/H2-F复合物，在980nm近红外光照射下，与F吸收峰重叠的UNP的发射带EEB1与F之间产生发光共振能量转移LRET信号，实现“关-开”转换，用共聚焦显微镜观察LRET通道的发光信号来实现活细胞内microRNA21的原位成像。

3.根据权利要求1或2所述的探针，其特征在于，在980nm近红外光照射下，UNP可同时产生包含发射带EEB1和自参比通道EEB2的多个互不干扰的发射带，利用EEB2作为参比对LRET信号进行校正，LRET通道与EEB2通道的信号比值I_LRET/I_EEB2与细胞内microRNA21的浓度成正比，可用于不同细胞内microRNA21的相对定量比较，并可克服成像仪器参数波动造成的信号不稳定。

4.根据权利要求1或2所述的探针，其特征在于，单个待测microRNA21可以循环使用，生成多个UNP-H1/H2-F复合物，从而对LRET信号进行放大，实现细胞内低浓度待测microRNA21的成像检测。

5.根据权利要求1或2所述的探针，其特征在于，由于UNP可以保护其负载的核酸耐受细胞内核酸酶的影响，基于LRET过程的信号开关避免了假阳性信号，980nm近红外激发排除了细胞自荧光的影响，从而使该探针对microRNA21的检测具有高特异性。