[发明专利]一种黑色素转运抑制率的快速检测方法

权利要求书

1.一种黑色素细胞的黑色素转运抑制率的快速检测方法，其特征是包括以下步骤：

（1）配制完全培养基；

（2）取对数期的黑色素细胞，用步骤（1）配制的完全培养基将细胞调成特定密度的细胞悬液并加进100mm培养皿中（同时设置空白对照组、阳性对照组和实验组），把细胞放进培养箱中培养，待细胞贴壁后，往实验组中加入特定浓度的实验样品，培养48小时后，收集细胞培养基，将培养基按顺序加进96孔板中，每孔200uL；

（3）采用酶标仪对步骤（2）中的空白对照组的细胞培养基进行全波长扫描，放置样品，对样品进行扫描，放上待测样品，执行扫描，即得到全波长的样品光谱图；扫描出来的吸光度值和波长的关系曲线就是培养基中黑色素的光谱曲线；根据扫描的光谱曲线确定最大吸收波长的位置；

（4）根据步骤（3）得到的波长测量步骤（2）中的培养基的吸光度，根据公式算出黑色素转运的抑制率。

2.根据权利要求1所述的黑色素细胞的黑色素转运抑制率的快速检测方法，其特征是：步骤（1）中的完全培养基为无酚红DMEM培养基，含10%FBS和1%双抗。

3.根据权利要求1所述的黑色素细胞的黑色素转运抑制率的快速检测方法，其特征是：步骤（2）中得到细胞悬液的具体步骤为取对数期的黑色素细胞，去掉原有培养基，取2mlPBS冲洗培养瓶底部的细胞，倒掉PBS，外加入2ml胰酶，消化3min后，加入步骤（1）的完全培养基3ml终止消化，并把细胞从培养瓶底部吹打下来，转移至15ml离心管中，于低速离心机中 1200r/min离心5min，弃去上清液，往细胞团中加入适量完全培养基吹散细胞团，用细胞计数器计算细胞密度，并把细胞悬液密度调成1×10⁵个/ml，往100mm培养皿中加入10ml细胞悬液。

4.根据权利要求1所述的黑色素细胞的黑色素转运抑制率的快速检测方法，其特征是：步骤（2）中采用的培养箱为CO2培养箱，37℃，含体积百分含量为5%的CO2。

5.根据权利要求1所述的黑色素细胞的黑色素转运抑制率的快速检测方法，其特征是：步骤（3）中酶标仪为全波长酶标仪，酶标仪设置扫描波长的范围：一般在200-600nm之间。

6.根据权利要求1所述的黑色素细胞的黑色素转运抑制率的快速检测方法，其特征是：步骤（3）中酶标仪设置扫描模式：一般选择ABS(吸光度)，设置扫描间距：即采样间距，一般选择1nm；对仪器进行基线扫描，即选择空白校准这步是给仪器调一个0%线和100%线。

7.根据权利要求1所述的黑色素细胞的黑色素转运抑制率的快速检测方法，其特征是：步骤（4）采用的计算公式为黑色素转运抑制率=1-OD实验组/OD空白组*100%。