[发明专利]一种沙棘叶片组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及果类作物组织培养技术领域，具体是一种沙棘叶片组织培养方法。

背景技术

沙棘(Hippophae rhamnoides L.)为胡颓子科(Elaeagnaceae)沙棘属(Hippophae L.)植物，是一种适应性很强的树种，具有广泛的生态效益和社会效益。其繁殖方式很多，常规林木繁育方法都能采用，但在规模化生产且要保证品质的前提下只能选择特定的繁育方法。前人以带腋芽的茎段、节间、茎尖等对沙棘快速繁殖进行初步研究，已有很多成功的报到。但是尚未出现以沙棘叶片作为材料进行快速繁殖的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以沙棘叶片作为材料的沙棘叶片组织培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种沙棘叶片组织培养方法，包括以下步骤：

步骤一、初代培养：取40日龄的试管苗叶片，剪成2.5-3.0cm2的小块，接种到愈伤组织诱导培养基上，每瓶10-15片叶；培养温度25℃左右，湿度50%-70%，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d；

所述愈伤组织诱导培养基的配方为1/2B5+6-BA0.5mg/L+IAA0.3mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%；

步骤二、继代增殖：取初代培养的无根苗剪切成茎尖、带腋芽的茎段分别接种到增殖培养基上；

所述增殖培养基的配方为1/2B5+6-BA0.3琼脂0.6%+蔗糖3%；

步骤三、生根培养：取继代增殖的无根苗，接种到生根培养基上；

所述生根培养基的配方为1/2B5+IBA0.3+琼脂0.6%+蔗糖3%；

步骤四、移栽：当长根的试管苗高度约5.0cm时，整瓶移出培养室，置于室温阴凉处4-5天，揭开瓶盖，在放置4-5d，将试管苗取出，用自来水轻轻洗去根部的琼脂，移栽到事先经高温灭过菌的基质中，将移栽后的试管苗浇透，用透明的膜盖在上方，保持湿度，逐渐通风透光；成活的幼苗用1/2B5大量元素母液浇透；

所述基质由草炭土和珍珠岩1:1混合而成。

作为本发明进一步的方案：步骤四中移栽后的最初的一周内湿度基本控制在95%以上，逐渐延长通风和光照时间，15d左右完全揭开帘子；白天温度应控制在25℃，夜间15-18℃。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明以沙棘无菌苗叶片为材料，选择各个培养阶段的适宜的培养基配方和适宜的移栽基质，实现较高的幼苗成活率，为其工厂化生产提供依据。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。

一种沙棘叶片组织培养方法，包括以下步骤：

步骤一、初代培养：取40日龄的试管苗叶片，剪成2.5-3.0cm²的小块，接种到愈伤组织诱导培养基上，每瓶10-15片叶；培养温度25℃左右，湿度50%-70%，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d；每隔3-5d观察记录一次；

所述愈伤组织诱导培养基的配方为1/2B5+6-BA0.5mg/L+IAA0.3mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%；

步骤二、继代增殖：取初代培养的无根苗剪切成茎尖、带腋芽的茎段分别接种到增殖培养基上；

所述增殖培养基的配方为1/2B5+6-BA0.3琼脂0.6%+蔗糖3%；

步骤三、生根培养：取继代增殖的无根苗，接种到生根培养基上，每隔3-5d观察根的诱导和生长情况；

所述生根培养基的配方为1/2B5+IBA0.3+琼脂0.6%+蔗糖3%；

步骤四、移栽：当长根的试管苗高度约5.0cm时，整瓶移出培养室，置于室温阴凉处4-5天，揭开瓶盖，在放置4-5d，将试管苗取出，用自来水轻轻洗去根部的琼脂，移栽到事先经高温灭过菌的基质中，将移栽后的试管苗浇透，用透明的膜盖在上方，保持湿度，逐渐通风透光；成活的幼苗用1/2B5大量元素母液浇透；

所述基质由草炭土和珍珠岩1:1混合而成。

上述，步骤四中移栽后的最初的一周内湿度基本控制在95%以上，逐渐延长通风和光照时间，15d左右完全揭开帘子；白天温度应控制在25℃，夜间15-18℃。

本发明的实验过程：

1材料与方法

1.1供试材料