[发明专利]一种固相合成戈那瑞林的方法

权利要求书

1. 一种固相合成戈那瑞林的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）活化保护氨基酸溶液

按保护氨基酸：缩合剂摩尔比为1:1-6溶解于N，N-二甲基甲酰胺；搅拌下慢慢加入有机碱，于室温环境中搅拌反应，得到活化后的保护氨基酸溶液，备用；有机碱：保护氨基酸的摩尔比为1-6:1；

所述保护氨基酸为N-芴甲氧羰基-甘氨酸、N-芴甲氧羰基-脯氨酸、N-芴甲氧羰基-精氨酸、N-芴甲氧羰基-亮氨酸、N-芴甲氧羰基-酪氨酸、N-芴甲氧羰基-丝氨酸、N-芴甲氧羰基-色氨酸、N-芴甲氧羰基-组氨酸或N-芴甲氧羰基-谷氨酸；所述缩合剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯中的一种或几种；所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、2,4,6-三甲基吡啶或N-甲基吗啡啉中的一种或几种；

（2）氨酸的接入

取Rink Amide AM树脂N,N-二甲基甲酰胺溶胀，加入活化后的N-芴甲氧羰基-甘氨酸溶液，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc-Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Gly-Rink Amide AM树脂；

取Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-脯氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；

取Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-亮氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；

取Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-精氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；

取Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-甘氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；

取Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-酪氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；

取Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-丝氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Ser (tBu)-Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；

取Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-色氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Trp (Boc) - Ser (tBu)-Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；

取Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-组氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- His (Trt)- Trp (Boc) - Ser (tBu)-Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到His (Trt)-Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；

取His (Trt)-Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入pGlu-OH，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到pGlu -Trp (Boc) - Ser (tBu)-Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到戈那瑞林肽树脂：pGlu-Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；

（3）酸解、纯化

向戈那瑞林肽树脂中加入酸解液，搅拌反应6小时，过滤洗涤，合并滤液后减压浓缩；加入无水乙醚沉淀，洗涤、抽干，得类白色粉末为戈那瑞林粗品；酸解液：戈那瑞林肽树脂为10-12mL：1g；所述酸解液为体积分数为5％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液；再采用高效液相色谱法进行纯化、转盐后，得到戈那瑞林精品。

2. 根据权利要求1所述的一种固相合成戈那瑞林的方法，其特征在：所述活化后的保护的氨基酸与树脂的摩尔比为1-3 : 1。