[发明专利]PDGFRβ单克隆重链抗体杂交瘤细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种PDGFRβ单克隆重链抗体杂交瘤细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)制备免疫原，所述的免疫原的结构通式为：PDGFRβ胞外区域-恒定区Fc；

(2)利用所述免疫原免疫HCAb小鼠；

(3)对所述HCAb小鼠进行1～7次加强免疫；

(4)制备所述HCAb小鼠的脾细胞悬液并与小鼠骨髓瘤细胞融合得杂交瘤细胞；

(5)鉴定杂交瘤细胞；

所述PDGFRβ胞外区域的氨基酸序列如SwissProt数据库编号为P09619蛋白的第330-530位所示。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述恒定区Fc为人的恒定区Fc。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述免疫原的恒定区Fc后带有His标签。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述免疫原的制备方法包括将含有免疫原的载体转染293细胞，扩增2周后取上清进行纯化。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述载体的骨架为载体pCpC。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中免疫原动物的血清效价为1:10⁴；

步骤(2)中所述免疫原的剂量为50μg；

步骤(3)中所述加强免疫的免疫剂量为25μg；

步骤(3)中所述加强免疫的第一次与步骤(2)所述免疫的时间间隔为2周；所述加强免疫之间的时间间隔为3周；

步骤(3)中所述加强免疫的次数为4～6次；

步骤(4)中所述小鼠骨髓瘤细胞为小鼠骨髓瘤细胞株SP20；

步骤(4)中所述脾细胞与所述骨髓瘤细胞的活细胞数目的比值为4:1；

和/或，步骤(5)中所述鉴定包括如下步骤：

a.对所得杂交瘤细胞进行离心得上清液；

b.利用流式细胞仪分析上清液中抗体对PDGFRβ受体阳性细胞的结合活性；

c.所述流式细胞仪分析实验中平均荧光强度高于50的杂交瘤细胞为符合条件的杂交瘤细胞。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述血清效价的检测方法为间接ELISA法。

8.一种PDGFRβ单克隆重链抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)增殖如权利要求1所述的制备方法得到的PDGFRβ单克隆重链抗体杂交瘤细胞；

(2)纯化步骤(1)增殖后的PDGFRβ单克隆重链抗体杂交瘤细胞得PDGFRβ单克隆重链抗体。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述增殖为将权利要求1所述的制备方法得到的PDGFRβ单克隆重链抗体杂交瘤细胞在400～600mL培养液中扩增2周。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述培养液的体积为500mL。

11.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述纯化包括如下步骤：

(1)对所述增殖后的PDGFRβ单克隆重链抗体杂交瘤细胞离心，取上清；

(2)用Protein A亲和层析技术进行纯化。