[发明专利]一种耐高温除臭保氮发酵有机肥菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种耐高温除臭保氮有机肥发酵菌剂在黑水牤虫粪二次堆肥中的应用，其特征在于：所述黑水牤虫粪为黑水牤转化厨余垃圾后的代谢生物质；所述的有机肥发酵菌剂为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCC1.775、雅致放射毛霉Actinomucor elegansCGMCC3.4389、蜡状芽孢杆菌Bacilus cereus CGMCC1.230、地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis CGMCC1.7461、沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas CGMCC1.5007、乳酸乳球菌Lactococcus lactis CGMCC1.2281、及酿酒酵母菌Saccharomyces cerevisiaeCGMCC2.1643七株菌组合而成的复合活性菌剂；

所述的耐高温除臭保氮有机肥发酵菌剂的制备方法包括如下步骤：

1)将保存在0～4℃环境中的各斜面菌种进行活化处理，枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis CGMCC1.775、雅致放射毛霉Actinomucor elegans CGMCC3.4389、蜡状芽孢杆菌Bacilus cereus CGMCC1.230、地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis CGMCC1.7461、沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas CGMCC1.5007、乳酸乳球菌Lactococcus lactisCGMCC1.2281、酿酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae CGMCC2.1643七株菌分别进行试管-摇床培养，获得各菌种一级种子液；

2)将上述培养发酵好的枯草芽孢杆菌、雅致放射毛霉、蜡状芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、乳酸乳球菌、酿酒酵母菌种子液按体积比3-5.5:0.5-1.5:1-3:1-4:1-3:4-8:1-3.5进行混合；

3)对步骤2)获得的混合菌液进行扩大培养，按质量浓度5％～7％向大容量发酵罐中加入新鲜培养基质—玉米面-蝇蛆虫渣提取物培养基；接种量为7％～12％，280-350rpm，培养24～30h；所制得的复合菌剂有效活菌数为8.5×10⁸～2.4×10¹⁰cfu/ml；所述的玉米面-蝇蛆虫渣提取物培养基配方为：2.5％～3.0％玉米面，1.5％～2.0％蝇蛆虫渣提取物，0.8％硝酸钾，0.05％硫酸镁，0.05％磷酸氢二钾，0.05％氯化钠，0.0001％硫酸亚铁，pH值7.2～7.4；所述蝇蛆虫渣提取物蛋白含量60％以上；

4)按照质量浓度1～2‰的比例向步骤3)中得到的复合菌剂液体中加入保护剂—山梨酸钾，搅拌均匀，搅拌参数为150～200rpm，45～60min；

5)向步骤4)中得到的复合菌剂液体中按照3～6g/L的比例添加载体硅藻土并搅拌，搅拌参数为50～120rpm，5～15min；即制得耐高温除臭保氮有机肥发酵菌剂。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisCGMCC1.775、蜡状芽孢杆菌Bacilus cereus CGMCC1.230和沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas CGMCC1.5007采用牛肉膏蛋白胨培养基进行培养；所述牛肉膏蛋白胨培养基的配方为：0.3％牛肉膏，1.0％蛋白胨，0.5％氯化钠，调节pH值至7.0～7.4；接种量为1％～2.5％，180～250rpm，培养24～30h。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，雅致放射毛霉Actinomucor elegansCGMCC3.4389和酿酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae CGMCC2.1643采用马铃薯-蔗糖培养基培养；所述马铃薯-蔗糖培养基的配方为：去皮马铃薯200克，切成小块，加水1000mL煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000毫升，加入2％蔗糖；接种量为1％～2.5％，180～250rpm，培养24～30h。