[发明专利]新型的牙周炎DNA疫苗及其制备方法在审
| 申请号： | 201710434117.4 | 申请日： | 2017-06-09 |
| 公开（公告）号： | CN107224574A | 公开（公告）日： | 2017-10-03 |
| 发明（设计）人： | 白国辉;管晓燕;田源;王方远;吴明松;陈彬;刘建国;王倩;李彩玉 | 申请（专利权）人： | 遵义医学院 |
| 主分类号： | A61K39/02 | 分类号： | A61K39/02;A61K39/39;C12N15/85;C12N15/31;C12N15/24;A61P31/04;A61P1/02 |
| 代理公司： | 重庆强大凯创专利代理事务所(普通合伙)50217 | 代理人： | 黄书凯 |
| 地址： | 563000 贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 新型 牙周炎 dna 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种DNA疫苗，为pVAX1-fimA/IL-15重组质粒，是由牙龈卟啉单胞菌W83型的菌毛蛋白基因fimA和SD大鼠IL-15基因经IRES基因序列连接后，插入真核表达载体pVAX1质粒得到。
2.根据权利要求1所述的DNA疫苗，其特征在于，所述的pVAX1-fimA/IL-15重组质粒，经酶切去除pVAX1质粒后，得到的fimA/IL-15的DNA序列如SEQ ID:1所示。
3.根据权利要求1或2所述的DNA疫苗的制备方法，包括如下步骤：
(1)、fimA/IL-15重组基因的制备；
(2)、pVAX1-fimA/IL-15重组质粒的构建并转化感受态细胞，筛选重组质粒；
(3)、重组质粒酶切后进行DNA测序鉴定，得到的fimA/IL-15的DNA序列如SEQ ID:1所示。
4.根据权利要求3所述的DNA疫苗的制备方法，其特征在于；包括如下步骤：
(1)、菌毛蛋白基因fimA、SD大鼠IL-15基因及IRES基因的克隆，fimA和IL-15基因通过IRES序列连接后得到fimA/IL-15重组基因片段；
(2)、将步骤(1)中获得的fimA/IL-15重组基因片段插入到pVAX1质粒，并转化感受态细胞DH5α，得到的pVAX1-fimA/IL-15重组质粒；
(3)、步骤(2)得到的pVAX1-fimA/IL-15重组质粒，经酶切鉴定正确后进行DNA测序，得到的fimA/IL-15的DNA序列如SEQ ID:1所示。
5.根据权利要求4所述的DNA疫苗的制备方法，其特征在于；
所述步骤(1)的具体操作为：
(1)、根据Genbank公布的fimA、IL-15以及pIRES2-EGFP的图谱中的IRES序列设计引物；
(2)、牙龈卟啉单胞菌W83型的培养及基因组DNA的提取，克隆fimA基因；
(3)、pVAX1及pIRES2-EGFP质粒的提取，克隆IRES序列；
(4)、SD大鼠总RNA的提取及逆转录，克隆IL-15基因；
(5)、fimA和IL-15基因通过IRES序列连接后得到fimA/IL-15重组基因片段。
6.根据权利要求4所述的DNA疫苗的制备方法，其特征在于；
所述步骤(2)的具体操作为：将步骤(1)中获得的fimA/IL-15重组基因片段插入到pVAX1质粒中，构建pVAX1-fimA/IL-15重组质粒，将上述重组质粒转化感受态细胞DH5α，重组质粒酶切鉴定正确后送DNA测序，序列如SEQ ID:1所示；为fimA/IL-15。
7.根据权利要求1或2所述的DNA疫苗在制备防治牙周炎的药物或者疫苗中的用途。
8.一种药物或疫苗，包含根据权利要求1或2所述的DNA疫苗以及药学可接受载体。
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