[发明专利]一种柠檬黄多克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.一种柠檬黄多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将制备好的全抗原注射到免疫动物体内；

(2)再加强免疫3次后采血，检测血清效价；

(3)若血清效价达到要求，则大量采血，离心取上清，得到抗血清；

(4)将所得抗血清流过抗原免疫亲和填料柠檬黄-Agarose，血清中的抗柠檬黄抗体与偶联在填料上的柠檬黄特异吸附，洗掉杂质，用弱酸洗脱，即得到抗柠檬黄多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的柠檬黄多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的全抗原包括柠檬黄-KLH和柠檬黄-BSA。

3.根据权利要求1所述的柠檬黄多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述的全抗原的制备方法，包括以下步骤：

(1)先将柠檬黄溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，混匀直到全部溶解，再加入N,N'-二环己基碳二亚胺DCC，室温摇床反应30min，得到柠檬黄-NHS中间体；

(2)取血蓝蛋白KLH或牛血清蛋白BSA，分别溶解在0.1mol/L的磷酸二氢钠溶液中；

(3)将柠檬黄-NHS中间体和BSA或KLH混匀，室温摇床震荡反应2h，经G25Sephadex脱盐后，制得的柠檬黄-KLH疫苗和柠檬黄-BSA疫苗。

4.根据权利要求3所述的柠檬黄多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述的全抗原柠檬黄-KLH做注射用；所述的全抗原柠檬黄-BSA做检测包被用。

5.根据权利要求1所述的柠檬黄多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的免疫动物为新西兰大白兔。

6.根据权利要求1所述的柠檬黄多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的抗原免疫亲和填料的制备方法，包括以下步骤：

(1)将柠檬黄溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，然后加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，混匀直到全部溶解，再加入N，N'-二环己基碳二亚胺DCC，室温摇床反应30min，得到柠檬黄-NHS中间体；

(2)取赖氨酸琼脂糖磁珠Agarose中，用0.1mol/L磷酸二氢钠清洗后加入与Agarose等体积的丙酮；

(3)将制备好的柠檬黄-NHS中间体加到赖氨酸Agarose丙酮-磷酸二氢钠悬浮中摇床反应过夜，得到柠檬黄-Agarose；

(4)用100mL丙酮清洗柠檬黄-Agarose，再用含0.05％吐温20的磷酸缓冲液PBSt清洗，自然滴干后，即得抗原免疫亲和填料柠檬黄-Agarose。