[发明专利]一种超声提取的川白芷多糖及制备方法和应用在审
| 申请号: | 201710428440.0 | 申请日: | 2017-06-08 |
| 公开(公告)号: | CN107082824A | 公开(公告)日: | 2017-08-22 |
| 发明(设计)人: | 吴卫;唐小琴;侯凯;王庆;李丹丹;苏天骄;魏威 | 申请(专利权)人: | 四川农业大学 |
| 主分类号: | C08B37/00 | 分类号: | C08B37/00;A23L33/125;A61P17/00 |
| 代理公司: | 成都九鼎天元知识产权代理有限公司51214 | 代理人: | 钱成岑 |
| 地址: | 611130 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 超声 提取 白芷 多糖 制备 方法 应用 | ||
1.一种超声提取的川白芷多糖,其特征在于:所述川白芷多糖同时存在α构型和β构型多糖链接方式,其表观分子量为170.07kDa;所述川白芷多糖由川白芷药材经超声提取、醇沉除杂、去蛋白去盐后,再经DEAE-琼脂糖凝胶FF柱和琼脂糖凝胶6FF凝胶柱层析分离而得。
2.根据权利要求1所述川白芷多糖的制备方法,其特征在于:具体包括以下步骤:
A:脱脂脱色素:将川白芷药材洗净烘干粉碎,得粉末;将所述粉末先加入石油醚脱脂后,再加入高浓度乙醇溶液脱除部分色素及低聚糖;
B:提取:将脱脂脱色素后的粉末加水超声提取后,离心,收集上清液,浓缩,得浓缩液;
C:醇沉除杂:将所述浓缩液醇沉除去水溶性杂质后得到川白芷粗多糖;
D:去蛋白:将所述川白芷粗多糖采用酶+Sevag结合法去除蛋白;
E:透析去盐:将所述去除蛋白后的川白芷粗多糖采用透析法去除无机盐和小分子物质,得去盐川白芷多糖;
F:将所述去盐川白芷多糖进行DEAE-琼脂糖凝胶FF柱层析,收集并合并第三个洗脱峰的收集液,浓缩,透析,冻干;
G:将步骤F冻干后的川白芷多糖进行琼脂糖凝胶6FF凝胶柱层析,收集并合并主峰的洗脱液,浓缩,透析,冻干,即得。
3.根据权利要求2所述的川白芷多糖的制备方法,其特征在于:所述步骤A中,将川白芷药材洗净,于40-50℃烘干,粉碎,过40目筛,得川白芷粉末;取所述川白芷粉末加入石油醚加热回流脱脂4h,过滤,滤渣于40-50℃烘干后,再加入80%乙醇加热回流提取4h,过滤,滤渣挥干乙醇后粉碎,于40-50℃烘干,备用;所述石油醚的用量按每克川白芷粉末计为2-4mL,所述80%乙醇的用量按每克川白芷粉末计为2mL。
4.根据权利要求3所述的川白芷多糖的制备方法,其特征在于:所述步骤B中加水量以每克脱脂脱色素后的粉末计为1-4mL,提取次数为1-4次,提取时间为0.5-1.5h。
5.根据权利要求4所述的川白芷多糖的制备方法,其特征在于:所述步骤D中,向浓缩液中加入无水乙醇至混合溶液乙醇终浓度为50-70%,于0-6℃静置12-24h,离心,取离心沉淀加水溶解后,再次离心,取再次离心后的上清液,向所述上清液加入无水乙醇至混合溶液乙醇终浓度为50-70%,于0-6℃静置12-24h,第三次离心,取第三次离心后的沉淀,得川白芷粗多糖,备用。
6.根据权利要求5所述的川白芷多糖的制备方法,其特征在于:所述步骤D中所用酶为木瓜蛋白酶,所用Sevag试剂为氯仿:正丁醇=4:1,所述去蛋白的次数为10次。
7.根据权利要求6所述的川白芷多糖的制备方法,其特征在于:所述步骤E中,采用截留分子量为8000-14000Da的透析袋,室温蒸馏水透析24h后,换干净蒸馏水再透析8h,重复2次。
8.根据权利要求7所述的川白芷多糖的制备方法,其特征在于:所述步骤F中,将川白芷多糖加水溶解后,上样于DEAE-琼脂糖凝胶FF柱,先以1.5倍柱体积的蒸馏水洗脱后,再以水和2mol/L的NaCl溶液混合洗脱,实现0~1.5mol/L NaCl溶液的梯度洗脱,分管收集,收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量,绘制苯酚-硫酸反应曲线图,并绘制反应曲线,根据所述反应曲线合并同一洗脱峰的收集液,浓缩,透析,冻干。
9.根据权利要求8所述的川白芷多糖的制备方法,其特征在于:将步骤F冻干后的川白芷多糖加水溶解后,上样于琼脂糖凝胶6FF凝胶柱,洗脱液为0.05mol/L NaCl溶液,分管收集,收集液用苯酚-硫酸法检测多糖含量,绘制苯酚-硫酸反应曲线图,采用考马斯亮蓝G250法测定蛋白含量,并绘制反应曲线,根据所述反应曲线收集主峰的洗脱液,浓缩,透析,冻干。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的川白芷多糖在制备具有美白作用的日化用品、食品、保健品或药品中的用途。
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