[发明专利]一种发酵制备鸡血液体肥料的方法

权利要求书

1.一种发酵制备鸡血液体肥料的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）鸡血发酵前处理：将新鲜鸡血放置在已灭菌好的盛放器皿内，加盖保鲜膜，放置在无菌室内，在室温下自然发酵30天；

（2）菌种培养和分离：将发酵的样品充分搅拌混匀后，采用10倍梯度稀释法将样品分别涂置A细菌平板培养基、B霉菌平板培养基上，并分别在细菌、霉菌适宜的温度条件下培养；

（3）菌种纯化：将上述（2）中培养的优势菌种分别纯化分离，纯化三代置于4℃冰箱中保存备用；

（4）优势菌种筛选：将上述（3）中得到的优势菌种经过菌株解磷、解钾、固氮试验、透明圈试验、蛋白质含量测定、可溶性蛋白质含量、氨基酸态氮含量的相关指标进行测定筛选，最终得到细菌A₇，A₈，霉菌B₁、 B₄四种菌株为优势菌株；

（5）优势菌株鉴定：菌株的初步鉴定通过生理生化试验对照《伯杰细菌鉴定手册》和《真菌鉴定手册》，细菌和霉菌分别采用16SrDNA扩增和ITS扩增、测序，得出细菌A₇ 为苏云金芽孢杆菌菌株； A₈为希瓦氏菌株；霉菌B₁为青霉菌属；B₄为塔宾曲霉；

（6）优势菌株发酵鸡血最佳条件筛选：在发酵过程当中，分别以发酵温度、时间、接种量、转速为因素，采用响应面法确定最佳条件，最终得出在温度为32℃、接种量为1%、转速为200rpm的条件下培养5天时发酵效果最佳；

（7）将新鲜的鸡血在上述筛选的条件下进行大批的发酵培养最终得到鸡血液体肥料。

2.根据权利要求1所述的一种发酵制备鸡血液体肥料，其特征在于改良察式培养基为：鸡血2g、磷酸氢二钾1g、七水硫酸镁0.5g、氯化钾0.5g、硫酸亚铁0.01g、蔗糖30g，分别溶解于1000ml蒸馏水中，充分溶解后加入琼脂15-20g。