[发明专利]一种核酸杂交检测方法

说明书

本发明涉及一种核酸检测方法，特别涉及一种核酸杂交检测方法，属于生物技术领域。本发明建立了一种新的核酸物质检测方法，通过该方法的建立扩大核酸检测产品在医疗、科研、食品安全等领域的使用范围。本发明方法通过基质、捕获核酸序列、目标核酸、结合核酸序列、检测核酸序列、微球、信号核酸序列和信号基团实现目标核酸的捕获和检测。相对于PCR技术需要扩增，本发明在不增加检测物浓度的前提下实现目标核酸的检测，且具有稳定性好，成本低，检测速度快，对环境要求低等优点。

技术领域

本发明涉及一种核酸检测方法，特别涉及一种核酸杂交检测方法，属于生物技术领域。

背景技术

目前主流的核酸检测技术有基因测序、基因芯片、聚合酶链式反应等，以及基于非靶标物质扩增的技术，例如基于抗体捕获的第二代杂交捕获技术(德国凯杰公司的HC2)，基于RNA逆转录的核酸序列扩增技术(美国豪洛捷)，基于支链DNA信号放大的快速捕获杂交技术(科蒂亚生物)等。但目前的各种方法均存在各种不足，如基因测序成本居高不下，基因芯片操作复杂、检测灵敏度低，聚合酶链式反应对实验室要求高等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种核酸杂交检测方法，该方法可以快速捕获杂交目标核酸。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种核酸杂交检测方法，该方法包括如下步骤：

(1)根据目标核酸的序列设计捕获核酸序列、结合核酸序列、检测核酸序列和信号核酸序列，其中捕获核酸序列5’端进行氨基修饰，信号核酸序列5’标记信号基团；

(2)将捕获核酸序列固定到基质上；

(3)将结合核酸序列和检测核酸序列固定到微球上；

(4)通过核酸杂交反应，捕获核酸序列和待测目标核酸结合；

(5)通过核酸杂交反应，固定在微球上的结合核酸序列和待测目标核酸结合；

(6)通过核酸杂交反应，标记了信号基团的信号核酸序列和固定在微球上的检测核酸序列结合；

(7)通过检测信号基团是否存在来判断待测的样本中是否含有目标核酸。

本发明建立了一种新的核酸物质检测方法，通过该方法的建立扩大核酸检测产品在医疗、科研、食品安全等领域的使用范围。本发明方法通过基质、捕获核酸序列、目标核酸、结合核酸序列、检测核酸序列、微球、信号核酸序列和信号基团实现目标核酸的捕获和检测。

作为优选，所述的微球是聚苯乙烯(PS)、交联聚苯乙烯/聚二乙烯基苯(P[S/DVB])、二氧化硅或聚甲基丙烯酸酯(PMMA)微球，微球的直径为50-500nm。本发明采用的微球是表面聚合链霉亲和素的微球。

作为优选，所述捕获核酸序列和目标核酸的特定片段互补，且长度在15-50个碱基。

作为优选，所述信号核酸序列和目标核酸的特定片段互补，且长度在15-50个碱基。

作为优选，所述基质是微孔板、微球、玻片、硅片或微流体芯片。

作为优选，步骤(3)中，当基质是氨基修饰的微孔板则通过戊二醛固定，当基质是羧基修饰的微球时，通过1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺固定；步骤(4)中，当基质是氨基修饰的微球时通过戊二醛固定，当基质是羧基修饰的微球时，通过1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺固定。

作为优选，捕获核酸序列和信号核酸序列分别针对目标核酸的不同片段。

作为优选，所述信号基团选自胶体金、荧光素、化学发光酶、放射性元素或稀土元素。