[发明专利]一种产芳樟醇的解脂耶氏酵母基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种产芳樟醇的解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）基因工程菌，其特征在于，其是将经优化的外源猕猴桃（Actinidia arguta）芳樟醇合成酶基因（LIS）转化尿嘧啶和亮氨酸营养缺陷型解脂耶氏酵母Po1f构建而成，所述LIS的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示；

其还转化了内源基因，所述内源基因为HMG1、IDI1和/或ERG；所述IDI1为单拷贝、双拷贝或三拷贝，所述ERG基因为ERG8、ERG10、ERG12、ERG19或ERG20^F88W-N119W中的一种，其中所述ERG20^F88W-N119W的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。

2.如权利要求1所述的解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述内源基因为HMG1。

3.如权利要求1所述的解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述内源基因为组合1）HMG1和IDI1、2）HMG1和ERG、或者3）HMG1、IDI1和ERG。

4.如权利要求3所述的解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述ERG为ERG12或ERG20^F88W-N119W。

5.如权利要求1~4任一项所述的解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述基因均位于重组载体上；其中所述的外源猕猴桃芳樟醇合成酶基因的重组载体为质粒pINA1312；所述的内源基因的重组载体为质粒pINA1312或pINA1269。

6.一种产芳樟醇的方法，其特征在于，其包括以下的步骤：培养如权利要求1~5任一项所述的解脂耶氏酵母基因工程菌，添加十二烷进行两相发酵得发酵液，萃取发酵液的十二烷相；其中培养基为添加有碳源的YP培养基，所述碳源包括1）葡萄糖、柠檬酸、甘油和果糖中的一种、或者2）柠檬酸与选自葡萄糖、甘油和果糖中的一种或一种以上的组合。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，总的所述碳源的终浓度为20 g/L。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的碳源为柠檬酸和果糖。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述柠檬酸和果糖的浓度均为10 g/L；单位L为添加碳源后培养基的总体积。

10.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述碳源为柠檬酸时，所述碳源还包括丙酮酸。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述丙酮酸的浓度为2~8 g/L，所述柠檬酸浓度为20 g/L；单位L为添加碳源后培养基的总体积。

12.如权利要求1~5任一项所述的解脂耶氏酵母基因工程菌在制备芳樟醇中的应用。