[发明专利]引物探针组合、PCR反应液、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种引物探针组合，其特征在于，包括用于检测百日咳鲍特氏菌的引物和用于检测百日咳鲍特氏菌的探针，所述用于检测百日咳鲍特氏菌的引物包括上游引物和下游引物，其中，

所述用于检测百日咳鲍特氏菌的上游引物如序列表中SEQ ID NO.1所示；

所述用于检测百日咳鲍特氏菌的下游引物如序列表中SEQ ID NO.2所示；

所述用于检测百日咳鲍特氏菌的探针如序列表中SEQ ID NO.3所示；

其中所述用于检测百日咳鲍特氏菌的探针的5＇端连接有FAM荧光基团，其3＇端连接有TAMRA淬灭基团。

2.一种PCR反应液，其特征在于，包括权利要求1所述的引物探针组合。

3.根据权利要求2所述的PCR反应液，其特征在于，所述用于检测百日咳鲍特氏菌的探针的上游引物和用于检测百日咳鲍特氏菌的探针的下游引物的终浓度均为0.8μM，所述用于检测百日咳鲍特氏菌的探针的终浓度为0.4μM。

4.根据权利要求2所述的PCR反应液，其特征在于，所述PCR反应液还包括荧光定量PCR扩增试剂、内标质粒、用于扩增内标质粒中内标片段的引物和用于检测内标片段的探针，所述用于扩增内标质粒中内标片段的引物包括内标片段上游引物和内标片段下游引物，其中，

所述内标片段上游引物如序列表中SEQ ID NO.4所示；

所述内标片段下游引物如序列表中SEQ ID NO.5所示；

所述用于检测内标片段的探针如序列表中SEQ ID NO.6所示；

其中，所述用于检测内标片段的探针的5＇端连接有HEX荧光基团，其3＇端连接有TAMRA淬灭基团。

5.根据权利要求4所述的PCR反应液，其特征在于，所述内标片段上游引物和所述内标片段下游引物的终浓度均为0.8μM，所述用于检测内标片段的探针的终浓度为0.4μM。

6.根据权利要求4所述的PCR反应液，其特征在于，所述内标质粒为以pUC57为载体的内标片段重组质粒，其终浓度为1×10³copy/ml。

7.根据权利要求6所述的PCR反应液，其特征在于，所述内标质粒中内标片段的DNA序列如序列表中SEQ ID NO.7所示。

8.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求2-7中任一项所述的PCR反应液。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控品、阳性质控品及工作标准品。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性质控品为生理盐水。

11.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性质控品为1×10⁵copy/ml的以pUC57为载体的百日咳鲍特氏菌的基因片段重组质粒。

12.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述工作标准品包括第一工作标准品、第二工作标准品、第三工作标准品和第四工作标准品，其中，

所述第一工作标准品为1×10³copy/ml的以pUC57为载体的百日咳鲍特氏菌的基因片段重组质粒；

所述第二工作标准品为1×10⁴copy/ml的以pUC57为载体的百日咳鲍特氏菌的基因片段重组质粒；

所述第三工作标准品为1×10⁵copy/ml的以pUC57为载体的百日咳鲍特氏菌的基因片段重组质粒；

所述第四工作标准品为1×10⁶copy/ml的以pUC57为载体的百日咳鲍特氏菌的基因片段重组质粒。

13.根据权利要求11或12所述的试剂盒，其特征在于，所述百日咳鲍特氏菌的基因片段重组质粒的DNA序列如序列表中SEQ ID NO.8所示。

14.一种如权利要求8所述的试剂盒在检测百日咳鲍特氏菌中的应用。