[发明专利]一种检测磷酸特地唑胺异构体杂质的方法

权利要求书

1.一种磷酸特地唑胺中对映异构体的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取磷酸特地唑胺或含磷酸特地唑胺的制剂适量，用碱性磷酸酶溶液水解，反应后加乙腈溶解稀释，分离有机层，干燥后用无水乙醇溶解稀释；

(2)将步骤(1)所得溶液注入液相色谱仪，完成磷酸特地唑胺与其对映异构体的分离测定；

其中，所述色谱分析采用三(3,5-二甲苯基)-氨基甲酸酯直链淀粉填料的手性色谱柱，以正己烷-无水乙醇溶液为流动相，所述流动相中正己烷与无水乙醇的体积比为40:60～60:40，且所述正己烷-无水乙醇溶液中包含选自甲酸、乙酸、三氟乙酸中的一种，其体积百分浓度为0.05％～0.15％。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相中正己烷与无水乙醇的体积比为44:56～50:50。

3.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于所述步骤(1)中碱性磷酸酶溶液的pH范围为pH8.8～pH9.2，且所加入的磷酸酶与磷酸特地唑胺的质量比为(3.6～4.4)：(8～12)。

4.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于所述碱性磷酸酶溶液的制备方法为：称取碱性磷酸酶适量，加pH缓冲溶液溶解，摇匀，配制成质量浓度为2mg/ml的溶液。

5.如权利要求4所述的检测方法，其中所述pH缓冲溶液的制备方法为：称取硼酸适量，加水溶解，加入适量1mol/L NaOH溶液和0.1mol/L MgCl₂溶液，然后加水稀释摇匀，即得。

6.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于所述步骤(1)中酶水解反应的温度为35～39℃，酶水解反应的时间为1.5～2.5h。

7.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于所述步骤(2)的流动相为正己烷-无水乙醇-三氟乙酸混合溶液，正己烷：无水乙醇：三氟乙酸体积比约47:53:0.1。

8.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于所述步骤(2)中色谱柱为CHIRALPAKAD或CHIRALPAK AD-H。

9.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于所述步骤(2)中色谱柱为CHIRALPAKAD-H，250mm×4.6mm，5μm。

10.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于所述步骤(2)中色谱分析的检测波长为300±2nm，流动相流速为0.5ml/min～2ml/min，色谱柱温度为35～45℃，样品进样量为10～30μl。