[发明专利]分离纯化Salsolinol合成酶的方法有效
| 申请号： | 201710405322.8 | 申请日： | 2017-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN107460183B | 公开（公告）日： | 2020-05-22 |
| 发明（设计）人： | 陈薛钗;邓玉林 | 申请（专利权）人： | 北京工业大学;北京理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88 |
| 代理公司： | 北京思海天达知识产权代理有限公司 11203 | 代理人： | 张立改 |
| 地址： | 100124 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分离 纯化 salsolinol 合成 方法 | ||
1.分离纯化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)采用高氯酸沉淀法对Salsolinol合成酶的粗酶液进行预处理；
(2)将步骤(1)经过高氯酸处理的Salsolinol合成酶的粗酶液中加入K2CO3，于-80℃放置15分钟后取出，离心，取上清液；
(3)对步骤(2)所得上清液进行超滤，至少包括采用截留分子量3kD的超滤管；
(4)对步骤(3)超滤后的滤液采用亲水色谱(HILIC)的方法进一步分离纯化Sal合成酶。
2.按照权利要求1所述的分离纯化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，采用硅胶、氰基或氨基色谱柱，采用乙腈水溶液作为流动相，乙腈的体积百分含量为50-95％，按照乙腈比例从高到低依次洗脱。
3.按照权利要求1所述的分离纯化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，进行两次亲水色谱(HILIC)分离纯化。
4.按照权利要求1所述的分离纯化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，还包括在采用亲水色谱(HILIC)的方法进一步分离纯化Sal合成酶之后再通过电泳方法进一步分离纯化分子量相对更小的Sal合成酶。
5.按照权利要求1所述的分离纯化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，步骤(1)采用高氯酸溶液，高氯酸溶液中还含有偏亚硫酸钠和EDTA。
6.按照权利要求5所述的分离纯化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，高氯酸溶液含1M高氯酸、10mM偏亚硫酸钠和10mM EDTA。
7.按照权利要求6所述的分离纯化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，高氯酸溶液与Salsolinol合成酶的粗酶液的体积比为1:5。
8.按照权利要求1所述的分离纯化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，步骤(2)中K2CO3的摩尔数是步骤(1)中高氯酸的0.5倍。
9.按照权利要求1所述的分离纯化Salsolinol合成酶的方法，其特征在于，还包括在采用截留分子量3kD的超滤管之前，采用截留分子量大于3kD的超滤管进行超滤。
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