[发明专利]一种筛选炎性体NLRP3激活剂及抑制剂的荧光细胞传感器

权利要求书

1.一种筛选炎性小体NLRP3抑制剂的方法，其特征在于，所述方法是在稳转细胞系培养液中加入一定浓度的待测试剂，在宽场成像高内涵下连续拍摄，观察细胞荧光变化；所述稳转细胞系的构建，是将含有NLRP3受体核心启动子区和绿色荧光蛋白基因的质粒进行慢病毒的包装，得到含目的质粒的慢病毒液，然后使用获得的含目的质粒的慢病毒液对Thp-1细胞进行感染，筛选获得稳转细胞系；所述慢病毒的包装主要通过首先将质粒通过脂质体转染的方法转入HEK293T细胞，转染进行48-72h后，收集细胞培养上清液，离心后过滤去沉淀，即为所述含目的质粒的慢病毒液；所述对Thp-1细胞进行感染，具体是：将Thp-1细胞按照2.5×10⁵/mL接种于12孔板，采取感染复数100MOI进行感染，加入150μL的病毒液感染三天后，加入1μg/mL的嘌呤霉素进行筛选，每两天更换一次新鲜培养液，每三天将嘌呤霉素的浓度提高一倍，连续筛选10天即得到稳转细胞系；所述抑制剂为光甘草定；所述NLRP3受体核心启动子区的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法是筛选炎性小体NLRP3抑制剂，是先在稳转细胞系培养液中加入NLRP3激活剂，刺激炎性小体NLRP3的激活；然后加入一定浓度的待测试剂，如果观察到细胞荧光比起添加NLRP3激活剂的对照组出现了下降，就代表加入的待测试剂为炎性小体NLRP3抑制剂。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述NLRP3激活剂为脂多糖。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法是在宽场成像高内涵仪器下捕获绿色荧光信号，激发波长490nm，发射波长530nm。