[发明专利]一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及癌症诊断检测用的试剂盒技术领域，具体为一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒及其检测方法。

背景技术

中国抗癌协会甲状腺癌专业委员会主任委员高明教授称，近年来，我国甲状腺癌高发，已成为增长速度最快的恶性肿瘤，发病率10年增长了近5倍。甲状腺癌尤其好发于中青年女性，女性和男性比例为3：1，已成近20年来我国癌症谱中女性恶性肿瘤上升速度最快的肿瘤。如今在一、二线城市的女性群体中，该病发病率基本位列三甲，有的甚至已跃居榜首。临床上甲状腺良性和恶性肿瘤往往仅表现为甲状腺结节，专家提醒甲状腺癌患者关键在于早发现、早治疗，甲状腺结节的良恶性鉴别诊断尤其重要。中华医学会内分泌学会的报告显示，甲状腺结节的患病率是18.6%，这意味着我国每5人中就有近1人存在甲状腺结节。也就是说，我国有近2.8亿人要进行甲状腺结节的良恶性鉴别诊断。

临床治疗发现，甲状腺癌的早期诊断及治疗非常重要。

肿瘤标志物(tumor markers，TM)是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放，或由机体对肿瘤细胞反应而产生的标志肿瘤存在和生长的一类物质。这些物质在正常成人中不存在或者是在癌症患者中出现的水平显著高于正常人。目前肿瘤标志物检测技术被认为是早期发现无症状微灶肿瘤的唯一途径，这一检测技术可先于X光片、超声、CT、MRI或PET-CT等物理检查发现肿瘤。可用于高危人群恶性肿瘤的筛查，肿瘤诊断与鉴别诊断，评估治疗的效果，预测或监视肿瘤复发或转移。目前，市场上还没有针对甲状腺癌的快速高效诊断试剂盒问世，严重影响到甲状腺癌早期发现及治疗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度高、准确性强且使用方便高效的用于甲状腺癌体外诊断试剂盒及其检测方法，以解决上述背景技术中提出的甲状腺癌诊断存在不足的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒，包括捕获抗体，所述捕获抗体是L选择素制得的单克隆抗体。

优选的，所述捕获抗体的制备方法包括的步骤如下：

S1：抗原的制备；把L选择素的基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到抗原；

S2：捕获抗体的制备；将上述抗原免疫哺乳动物，得到相应的单克隆抗体为捕获抗体。

优选的，所述试剂盒还包括检测抗体，所述检测抗体为L选择素制得的多克隆抗体。

优选的，所述检测抗体的制备方法包括的步骤如下：

S1：抗原的制备；把L选择素的基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到抗原；

S2：检测抗体的制备；将上述抗原免疫哺乳动物，得到相应的多克隆抗体为检测抗体。

优选的，所述捕获抗体预先包被于微量滴定板的孔内；

本发明还提供一种技术方案：一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

S1：抗原的制备：将L选择素基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到所需的抗原；

S2：捕获抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的单克隆抗体，所述单克隆抗体作为本试剂盒的捕获抗体；

S3：检测抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的多克隆抗体，所述多克隆抗体作为本试剂盒的检测抗体；

S4：捕获抗体包被：

S4.1：用碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液将浓度为1μg/ml的捕获抗体包被微量滴定板的孔；

S4.2：封盖微量滴定板并在4℃下孵育过夜；

S4.3：弃去包被液，并用洗涤液洗涤微量滴定板两次，每次在微孔中加入200μl PBST，除去洗涤液和剩余的液滴，晾干放于4℃环境中；

S5：封闭：每孔添加200μl封闭缓冲液，封闭包被孔中剩余的蛋白质结合位点。

本发明提供另一种技术方案：一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒的检测方法，包括以下步骤：

S1：抗原的制备：将L选择素基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达；

S2：捕获抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的单克隆抗体，所述单克隆抗体作为本试剂盒的捕获抗体；

S3：检测抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的多克隆抗体，所述多克隆抗体作为本试剂盒的检测抗体；

S4：捕获抗体包被：

S4.1：用碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液将浓度为1μg/ml的捕获抗体包被微量滴定板的孔；