[发明专利]一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒，其特征在于，包括捕获抗体，所述捕获抗体是L选择素制得的单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒，其特征在于，所述捕获抗体的制备方法包括的步骤如下：

S1：抗原的制备；把L选择素的基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到抗原；

S2：捕获抗体的制备；将上述抗原免疫哺乳动物，得到相应的单克隆抗体为捕获抗体。

3.根据权利要求1所述的一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括检测抗体，所述检测抗体为L选择素制得的多克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒，其特征在于，所述检测抗体的制备方法包括的步骤如下：

S1：抗原的制备；把L选择素的基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到抗原；

S2：检测抗体的制备；将上述抗原免疫哺乳动物，得到相应的多克隆抗体为检测抗体。

5.根据权利要求1或2所述的一种用于甲状腺癌体外诊断试剂盒，其特征在于，所述捕获抗体预先包被于微量滴定板的孔内。

6.一种根据权利要求5所述的用于甲状腺癌体外诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：抗原的制备：将L选择素基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到所需的抗原；

S2：捕获抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的单克隆抗体，所述单克隆抗体作为本试剂盒的捕获抗体；

S3：检测抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的多克隆抗体，所述多克隆抗体作为本试剂盒的检测抗体；

S4：捕获抗体包被：

S4.1：用碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液将浓度为1μg/ml的捕获抗体包被微量滴定板的孔；

S4.2：封盖微量滴定板并在4℃下孵育过夜；

S4.3：弃去包被液，并用洗涤液洗涤微量滴定板两次，每次在微孔中加入200μlPBST，除去洗涤液和剩余的液滴，晾干放于4℃环境中；

S5：封闭：每孔添加200μl封闭缓冲液，封闭包被孔中剩余的蛋白质结合位点。

7.一种根据权利要求5所述的用于甲状腺癌体外诊断试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：抗原的制备：将L选择素基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达；

S2：捕获抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的单克隆抗体，所述单克隆抗体作为本试剂盒的捕获抗体；

S3：检测抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的多克隆抗体，所述多克隆抗体作为本试剂盒的检测抗体；

S4：捕获抗体包被：

S4.1：用碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液将浓度为1μg/ml的捕获抗体包被微量滴定板的孔；

S4.2：封盖微量滴定板并在4℃下孵育过夜；

S4.3：弃去包被液，并用洗涤液洗涤微量滴定板两次，每次在微孔中加入200μl PBST，除去洗涤液和剩余的液滴，晾干放于4℃环境中；

S5：封闭：

S5.1：在微量滴定板的每个孔添加200μl封闭缓冲液，封闭包被孔中剩余的蛋白质结合位点；

S5.2：封盖微量滴定板并在37℃孵育1小时；

S6：加样：

S6.1：将100μl样品添加到每个孔，在37℃孵育60分钟；

S6.2：弃去样品，并洗涤微量滴定板三次，每次在微孔中加入200μl PBST；

S6.3：将100μl浓度为0.5μg/ml的检测抗体添加到每个孔；

S6.4：封盖微量滴定板并在37℃孵育1小时；

S6.5：用PBST洗涤微量滴定板四次；

S6.6：添加100μl标记二抗；

S6.7：封盖微量滴定板并在37℃孵育1小时；

S6.8：用PBST 洗涤微量滴定板四次；

S7：检测：

S7.1：将TMB溶液添加到每个孔，孵育15-30分钟，添加等体积的终止液，然后在450nm处读取光密度；

S7.2：由系列稀释液得到的数据绘制标准曲线，浓度标在X轴（对数标度）上，而吸光度标在Y轴（线性标度）上。

8.通过内插法在此标准曲线上得出样品浓度。