[发明专利]一种检测BRCA1/2基因突变的引物池及检测方法

权利要求书

1.一种检测BRCA1/2基因突变的引物组，其特征在于，包括三个引物池，引物池1由42对引物组成，所述42对引物的上下游引物序列依次如SEQ ID NO.1～84所示；引物池2由42对引物组成，所述42对引物的上下游引物序列依次如SEQ ID NO.85～168所示；引物池3由13对引物组成，所述13对引物的上下游引物序列依次如SEQ ID NO.169～194所示。

2.权利要求1所述引物组在制备BRCA1/2基因突变检测试剂盒方面的应用。

3.权利要求1所述引物组在构建包含BRCA1/2基因外显子及可变剪切区的文库方面的应用。

4.一种检测BRCA1/2基因突变的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述检测BRCA1/2基因突变的引物组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包含PCR反应液、DNA连接酶、引物消化液、连接缓冲液、P1接头序列、特异性接头1-16序列、文库扩增反应液、文库扩增引物、磁珠、75％乙醇和/或无核酸酶水。

6.一种包含BRCA1/2基因外显子及可变剪切区的文库，其特征在于，由如下步骤所述方法制备得到：

S1.分别用权利要求1所述三个引物池进行多重PCR扩增BRCA1/2外显子及可变剪切区；

S2.将三个引物池扩增所得目的片段合在一起，并进行文库构建。

7.根据权利要求6所述文库，其特征在于，由如下步骤所述方法制备得到：

(1)样本DNA提取：对静脉血进行DNA提取得到待测样本DNA；

(2)目的片段扩增：以待测样本DNA为模板，分别利用权利要求1所述三个引物池进行多重PCR反应，得到目的基因DNA片段；

(3)消化引物序列：将步骤(2)中三个引物池扩增所得目的基因DNA片段合在一起，然后与引物消化液混合反应，得到去除已知扩增引物的平末端目的基因DNA片段；

(4)接头连接：将步骤(3)得到的平末端目的基因DNA片段与连接缓冲液、P1接头、特异性接头1-16、DNA连接酶和无核酸酶水混合后进行连接反应，得到接头DNA片段；

(5)纯化连接产物及文库扩增：用磁珠对步骤(4)得到的接头DNA片段进行纯化，去除多余的小片段接头，得到纯化后的接头DNA片段；然后加入文库扩增引物及文库扩增反应液对纯化后的接头DNA片段进行PCR扩增，最后用磁珠对扩增的产物进行纯化，去除多余的大片段和小片段，得到文库。

8.根据权利要求7所述文库，其特征在于，将所述步骤(5)得到的文库稀释到200pmol/L作为测序文库。

9.根据权利要求7所述文库，其特征在于，步骤(5)所述PCR扩增反应体系如下：

10.根据权利要求7所述文库，其特征在于，步骤(5)所述PCR扩增反应条件如下：