[发明专利]一种基于口蹄疫病毒3B表位蛋白的化学发光检测试剂盒在审
申请号: | 201710389717.3 | 申请日: | 2017-05-27 |
公开(公告)号: | CN107219365A | 公开(公告)日: | 2017-09-29 |
发明(设计)人: | 常惠芸;刘泽众;邵军军;赵付荣;高闪电;刘伟;张永光 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/68;G01N21/76 |
代理公司: | 洛阳公信知识产权事务所(普通合伙)41120 | 代理人: | 程茗 |
地址: | 730000 甘肃*** | 国省代码: | 甘肃;62 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 口蹄疫病毒 蛋白 化学 发光 检测 试剂盒 | ||
1.一种基于口蹄疫病毒3B表位蛋白的化学发光检测试剂盒,所述试剂盒包括化学发光反应板、酶标抗体、血清稀释液、化学发光底物和化学发光增强剂,其特征在于:所述化学发光反应板混合包被口蹄疫病毒3B非结构蛋白区域中的3Bepi1和3Bepi2两种表位蛋白。
2.如权利要求1所述的化学发光检测试剂盒,其特征在于:所述3Bepi1和3Bepi2两种表位蛋白均经基因获取、表达载体的构建、蛋白的表达和纯化制备而成;其中,在基因获取过程中,首先设计引物,然后各组引物直接退火形成分别编码3Bepi1和3Bepi2表位蛋白的双链DNA分子。
3.如权利要求2所述的化学发光检测试剂盒,其特征在于:所述引物的组成包括各表位序列和pre-nick限制性酶切位点;其中,编码3Bepi1的双链DNA的引物序列如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示,编码3Bepi2的双链DNA的引物序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示。
4.如权利要求1所述的化学发光检测试剂盒,其特征在于:3Bepi1和3Bepi2两种表位蛋白在化学发光反应板上的包被条件均为25ng/孔。
5.如权利要求1-4任意一种所述的化学发光检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中化学发光反应板的包被过程为:用碳酸盐缓冲液稀释含有3Bepi1和3Bepi2表位蛋白的混合液,使混合液中3Bepi1和3Bepi2的浓度均为250ng/mL;将混合液以100µL/孔加入到化学发光反应板上,于4℃过夜进行包被;然后以300µL/孔加入封闭液,于37℃作用2h即完成包被。
6.如权利要求1所述的化学发光检测试剂盒,其特征在于:所述酶标抗体为HRP标记的兔抗牛IgG抗体;所述血清稀释液为PBS缓冲液,其中包含体积分数为0.1%的吐温和体积分数为1%的大肠杆菌裂解液;所述化学发光底物为0.1mmol/L 的鲁米诺溶液;所述化学发光增强剂包含0.07 mmol/L的IPP、3mmol/L的H2O2和体积分数为0.002%的Tween。
7.如权利要求1所述的化学发光检测试剂盒的检测方法,其特征在于:将待检血清样品和标准阴阳性对照血清用血清稀释液稀释5-40倍,37℃作用5min,再用PBST洗涤,加入用血清稀释液稀释20000倍的HRP标记的兔抗牛IgG抗体,37℃作用5min,经PBST漂洗后,加入化学发光底物和化学发光增强剂,5min后用化学发光免疫分析检测仪器检测发光值。
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