[发明专利]一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒的建立

权利要求书

1.一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：该系统表达盒包括真核启动子以及依次排列于真核启动子下游的目的基因插入位点、剪切肽序列和带有核定位信号的GAL4蛋白序列，所述真核启动子的上游设置有拷贝数为0~6个的上游激活序列UAS，所述表达盒由自身携带的启动子激活下游目的基因及GAL4 结合蛋白和GAL4激活蛋白的表达，GAL4结合蛋白会特异性的识别并结合上游激活序列，或者，在未能够结合上游激活序列情况下，利用与结合蛋白偶联的GAL4激活蛋白招募转录相关因子，使得DNA弯曲，形成一个可以和启动子特异结合的蛋白复合体，从而更快的起始基因转录；转录后翻译出来的GAL4结合蛋白和激活蛋白，在剪切肽以及核定位信号协助下会再次的和上游激活序列特异性结合，或者，在未能够结合上游激活序列情况下，进一步增强基因的转录和翻译。

2.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：所述真核启动子选自CMV。

3.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：所述剪切肽序列选自T2A、P2A、E2A或F2A序列。

4.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：所述GAL4蛋白的DNA激活域选自VP64、p65、Rta、GAL4AD、VP64中的一种或多种相互串联的形式，DNA结合域选自GAL4BD。

5.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：所述上游激活序列UAS的拷贝数优选为4~6个。

6.根据权利要求1所述一种增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒，其特征在于：所述系统表达盒包括顺次排列的以下元件：拷贝数为4的上游激活序列UAS、真核启动子CMV、目的基因插入位点、剪切肽序列、第一核定位信号序列、GAL4蛋白DNA结合域GAL4BD序列、GAL4蛋白DNA激活域VP64序列以及第二核定位信号序列。

7.一种如权利要求1所述的增强基因表达的自激活Gal4/UAS系统表达盒的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

将拷贝数为0~6个的上游激活序列UAS以及具有核定位信号且可以自行与目的基因翻译产物剪切分离的GAL4蛋白序列分别插入至骨架载体上真核启动子的上游及下游目的基因插入位点之后，得到所述系统表达盒。