[发明专利]一种奥利万星中间体A82846B的纯化方法

说明书

本发明提供了一种奥利万星中间体A82846B的纯化方法。具体而言，该方法包括，将A82846B发酵液上样至离子交换树脂层析柱，经洗脱分离，得到第一洗脱液；再将第一洗脱液上样至以硅胶C18或聚苯乙烯聚合物为填料的反相色谱层析柱，先进行杂质洗脱，再进行样品洗脱收集第二洗脱液，所获得A82846B纯度大于80％。本发明所述方法不仅能保证产品的品质，而且适合于扩大的商业化市场。同时，本发明还提供了制备奥利万星中间体A82846B盐的方法，以及利用A82846B盐合成奥利万星的方法。

技术领域

本发明涉及一种抗生素的分离纯化方法，具体而言，涉及一种奥利万星中间体A82846B分离纯化方法，利用以硅胶C18或聚苯乙烯聚合物为填料的反相色谱层析柱对含A82846B发酵液进行柱层析纯化分离，获得高纯度的奥利万星中间体A82846B。

背景技术

A82846B是一种天然的糖肽，是从土壤中分离的Kibdelosporangium aridum(拟孢囊属)的发酵产物，该糖肽的化学结构除多含一个4-表-万古胺(4-epi-Vancosamine)外与万古霉素相似，分子式是C75H91Cl₂N₉O₂₅，其抗菌活性比万古霉素大4～8倍，其阻断细胞壁合成的作用机理与其他糖肽如万古霉素和Teicoplanin相同，结构如下：

奥利万星(oritavancin)是以A82846B为前体的半合成糖肽类抗生素。奥利万星是最初由美国礼来公司研发，后转让给美国Targanta Therapeutics生物制药公司，对革兰阳性菌有广谱抗菌效果(包括耐万古霉素细菌)，用于治疗皮肤感染、肺炎球菌感染和全身感染的适应征。2014年8月7日FDA批准抗生素Orbactiv(oritavancin，奥利万星)注射液，用于由革兰氏阳性菌(包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，MRSA)导致的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染(ABSSSIs)成人患者的治疗。Orbactiv是FDA批准用于治疗的首个和唯一单剂量治疗方案的抗生素。同时，奥利万星作为首个上市的单剂量治疗方案的二代半合成糖肽类抗生素，作用机制与万古霉素、达巴万星和替考拉宁相似，但是，因其生物活性更强，半衰期更长，从而具有诱人的开发前景。随着耐药菌的不断出现，具有良好抗MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)和VRE(耐万古霉素肠球菌)作用的抗生素的开发速度却十分的缓慢。因此，奥利万星的出现给临床治疗耐药菌带来了新的希望和突破，而目前，A82846B主要由美国Targanta Therapeutics生物制药公司通过发酵进行生产，但由于A82846B发酵液中存在较多的杂质，尤其是A82846B结构类似物较多，使得纯度普遍不高，要达到色谱纯度美国药典标准有一定的难度。

近些年随着各种介质的色谱分离技术的发展，该技术在分离纯化糖肽类抗生素上得到了广泛的应用。

WO2006061166采用粒径5um的反相硅胶(Octadecyl silica gel)作为色谱介质，以含5mM醋酸铵且pH调节为4.0的3％甲醇溶液作为流动相，同时在流动相中加入2％的戊醇作为解析剂，进而分离获得色谱纯度大于97.5％的盐酸万古霉素。

CN101440127A采用离子交换填料葡聚糖凝胶Sephadex CM-25、琼脂糖SPSepharose或琼脂糖CM Sepharose进行色谱层析，以流动相为4-6％的碳酸氢铵，得到色谱纯度大于95％，小于98％的盐酸万古霉素，再通过加入氯化钠溶液进行盐析沉淀，分离并用乙醇顶洗，烘干得到盐酸万古霉素成品。

CN87106483A采用硅胶LP-1/C18作为色谱载体，以含1％NH₄H₂PO₄的乙腈-水溶液进行梯度洗脱，进而分离获得奥利万星中间体A82846A。而CN1119649A采用water C18Nova-pak柱反相制备A82846B衍生物。