[发明专利]快速检测SLCO1B1基因突变的试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域领域，具体来说是一种快速检测SLCO1B1基因突变的试剂盒及检测方法。

背景技术

新生儿中高胆红素血症是最常见的临床情况，8％-11％的新生儿会出现较为严重的胆红素血症,但是总血清胆红素(TSB)上升到一个很高的水平时，则会导致长期疾病的产生，包括血红素脑病、核黄疸,因此，意识到新生儿高胆红素血症的严重性是非常重要的,造成高胆红素血症的因素有很多，包括ABO、Rh不相容、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)和丙酮酸脱氢酶的缺乏、遗传性球形红细胞增多症、血红蛋白合成缺陷、甲状腺功能衰退、母乳性黄疸、颅内血肿等。

UDP糖基转移酶家族1、多肽A1(UGT1A1)、溶质载体有机阴离子转运蛋白家族酶中的有机阴离子转运多肽2(OATP2)作用于胆红素的摄取和代谢过程，对胆红素水平的调节起到重要作用。OATP2位于人类肝细胞膜底部外侧，是由溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1基因所(SLCO1B1)编码。近期有研究显示SLCO1B1突变体388G>A,521T>C和463C>A可能通过限制肝胆红素的摄取来影响。所以快速高效准确度高的检测SLCO1B1基因突变的试剂盒及检测方法对高胆红素血症的诊断和治疗都起到重要作用。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中的检测精度不高、特异性差缺陷，提供一种快速检测SLCO1B1基因突变的试剂盒及检测方法来解决上述问题。

本发明公开了一种快速检测SLCO1B1基因突变的试剂盒，包括：Taq DNA聚合酶、10×PCR反应缓冲液、MgCl₂、dNTPs、内源上游引物FI、内源下游引物RI、外源上游引物FO、外源下游引物RO。

作为优选，所述内源上游引物FI、内源下游引物RI、外源上游引物FO、外源下游引物RO分别是：

FI：5’-TCTTATCTACATAGGTTGTTTAAAGGATTC-3’

RI:5’-ACCATATATCCACATGTATGACCGAC-3’

FO:5’-TGTATTTATTAGCAGCATAAGAATGGAC-3’

RO:5’-CAAAGGGAAAGTGATCATACAATTTAAT-3’

作为优选，所述Taq DNA聚合酶的浓度为0.1U/ul，Mg²⁺浓度为4mM，dNTP混合物浓度为0.4mM，引物浓度为10μM。

作为优选，本发明还公开了上述快速检测SLCO1B1基因突变的试剂盒的检测方法，具体步骤如下：

(1)、提取血液DNA，并稀释至100ng/ul；

(2)、取20ul ARMS-PCR反应体系；

(3)、将混合后的反应液放入PCR仪中，设置程序如下：

95℃预变性10min，接着进入1个循环，95℃变性15s，45℃退火45s，72℃延伸45s，共32个循环，之后，继续72℃延伸8min，1个循环，然后将PCR反应产物进行凝胶电泳分析。

作为优选，所述的步骤(2)中，所述的ARMS-PCR反应体系，具体包括：10×PCR Buffer 2μl，FI 1μl，RI 1μl，FO 1-10μl，RO 1-10μl dNTP混合物1.6μl，Taq DNA聚合酶0.4μl，Mg2+1.6μl,DNA模板1μl，加ddH2O至20μl。

作为优选，所述的PCR反应体系中内源引物和外源引物的比为1:1-10。

作为优选，凝胶电泳分析中使用浓度为3％琼脂糖凝胶。

本发明相比现有技术具有以下优点：

本发明提供一种快速、高效、设备要求简单、低成本、操作容易的检测SLCO1B1基因突变的试剂盒及检测方法，具体包括：Taq DNA聚合酶、10×PCR反应缓冲液、MgCl₂、dNTPs、内源上游引物FI、内源下游引物RI、外源上游引物FO、外源下游引物RO。本发明中涉及ARMS PCR技术是一种特有的在同一个PCR反应中使用两对引物的PCR技术，从凝胶电泳的结果中就可以清晰分析出阳性突变和野生型扩增产物，同时也能保证扩增产物的高特异性和高准确性。本发明中试剂盒适用几乎所有的PCR仪，对设备的要求低，操作的可行性大大提高，相对于需要精密设备的检测方法，成本也大大降低。本发明试剂盒及检测方法可应用于SLCO1B1基因突变的初步检测，为SLCO1B1基因突变相关疾病，如：高胆红素血症，提供诊断依据，提高诊断效率。

附图说明