[发明专利]一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法

说明书

技术领域

本发明涉及氨基甲酸乙酯检测领域，具体涉及一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法。

背景技术

白酒作为中国传统的饮料酒，有着几千年的历史，并得到广泛传承。白酒在发酵过程中，会产生一种氨基甲酸乙酯，但是这种环境下产生的氨基甲酸乙酯一旦被人体直接吸收饮用，就会严重导致的身体致癌。

氨基甲酸乙酯可由自然反应及添加前驱物质两种方式形成，其致癌机理是通过两种不同途径破坏DNA结构。通常情况，主要通过减少前体物质的添加和形成抑制氨基甲酸乙酯的生成。氨基甲酸乙酯的通用检测方法为色谱与不同检测器结合使用或色谱与质谱联用，其中，检测前的样品前处理有液液萃取，固相萃取等不同形式。目前，我国检测控制工作虽然已经取得一定进展，但是检测方法不够经济有效，控制方法不能够普遍应用。关于控制方法的最新研究中，基因工程技术与系统生物技术的相关应用纳入进程，后基因组研究和蛋白质学等对基因的应用改造处于探索阶段。随着关于氨基甲酸乙酯的危害、形成机理等方面的研究不断深入，不同机制的控制方法不断出现。EC的处理逐步进入更加完善的状态。

鉴于氨基甲酸乙酯的上述危害之大，研究一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的检测方法迫在眉睫。目前氨基甲酸乙酯的检测多采用比色法或者气相色谱质谱法。其中，比色法只能半定量，不稳定，气相色谱质谱法操作费时、麻烦，且使用的试剂有毒，不利于人体健康。

发明内容

本发明正是为了避免上述现有技术所存在的不足之处，提供了一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法，实现快速检测氨基甲酸乙酯。

本发明为解决技术问题采用如下技术方案：一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法，操作步骤如下所示：

1)前处理：

取样至蒸发瓶中，在20-50℃，20-100MPa下旋转蒸发，用超纯水定容后再经过过滤，获得待测样品；

2)设定超高效液相色谱仪的条件为：

色谱柱为ACQUITYUPLC BEH C181.7μm 2.1×50mm Column液相色谱柱；

柱温为30～45℃；

样品室温度为10～20℃；

流动相：A相为乙腈，B相为体积浓度为(0.1％—0.5％的乙酸水溶液)；

流速为0.2～0.5mL/min；

洗脱方式为等度洗脱；

进样量为1～5μL；

检测所用时间为2min；

3)三重四级杆质谱检测器的条件设定为：

离子化方式：ESI+；

监测方式：多反应监测模式MRM；

锥孔电压：30～50V；

毛细管电压：3.00～5.00kV；

脱溶剂气温度：400～600℃；

脱溶剂气流量：500～1000L/h；

锥空气流量：50～100L/h；

离子源温度：150～500℃；

4)母离子以及碎片离子的扫描：

使用快速直接注入质谱的模式(Infusion模式)进入质谱，不需要加入流动相，标准样品的浓度保持配制的浓度，不会得到稀释，同种浓度的样品使用注入的进样模式在质谱中的相应要比普通模式进样的响应高3-5倍。

(4)质谱方法参数表如表1：

表1：质谱方法参数表

5)氨基甲酸乙酯的标准曲线的绘制：

取氨基甲酸乙酯标准品配制质量浓度范围在50～500ng/mL的一系列标准工作溶液，至少配标准样品5个，然后按照步骤2)所设定的条件用超高效液相色谱分离、质谱检测，以待测物的峰面积或者待测物在质谱中的响应值对其所相应的质量浓度进行线性回归，获得氨基甲酸乙酯的线性回归方程，线性回归方程所对应的曲线，即为氨基甲酸乙酯的标准曲线；以待测物在质谱中的响应值为例，氨基甲酸乙酯对应的线性回归方程及相关系数r²见表2，方程中X为氨基甲酸乙酯的浓度，Y为对应的待测物在质谱中的响应值。

表2：氨基甲酸乙酯的线性回归方程、相关系数、检出限、定量限

6)待测白酒酒样的检测：

将待测白酒酒样按步骤1)的方式进行前处理获得待测样品后，按步骤2)所设定的条件进行检测，获得待测样品的色谱图，根据母离子对待测样品进行定性，然后根据氨基甲酸乙酯的标准曲线对待测样品进行定量。

进一步地，步骤1)中采用的过滤方式为：经0.22μm滤膜针头过滤器过滤。