[发明专利]一种线粒体靶向的纳米光敏免疫复合药物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种线粒体靶向的纳米光敏免疫复合药物，其特征在于，包括纳米载体，以及分别与纳米载体连接的线粒体靶向共聚物、免疫佐剂共聚物和光敏剂，所述纳米载体为水溶性碳基纳米粒子，所述线粒体靶向共聚物为由磷脂聚乙二醇修饰的亲脂性阳离子共聚物，所述免疫佐剂共聚物为由磷脂聚乙二醇修饰的CpG ODN共聚物，所述光敏剂为近红外光激发下具有光动力及光热效应的有机染料，其中：磷脂的疏水脂肪链与水溶性碳基纳米粒子之间通过疏水作用力结合使得线粒体靶向共聚物和免疫佐剂共聚物负载于水溶性碳基纳米粒子上，光敏剂通过π-π堆积作用自组装于水溶性碳基纳米粒子表面；

所述水溶性碳基纳米粒子为纳米氧化石墨烯；

由磷脂聚乙二醇修饰的亲脂性阳离子共聚物中的亲脂性阳离子基团为苯基膦阳离子；

由磷脂聚乙二醇修饰的亲脂性阳离子共聚物是由氨基功能化的磷脂聚乙二醇与末端含有羧基的三苯基膦化合物通过酰胺反应所制得；

由磷脂聚乙二醇修饰的CpG ODN共聚物是由马来酰亚胺功能化的磷脂聚乙二醇中磷脂为疏水端，聚乙二醇-马来酰亚胺为亲水端，与标记有巯基的CpG ODN进行迈克尔加成反应生成；

所述磷脂为磷脂酰乙醇胺。

2.根据权利要求1所述的一种线粒体靶向的纳米光敏免疫复合药物，其特征在于，水溶性碳基纳米粒子的粒径为150nm～500nm。

3.根据权利要求1所述的一种线粒体靶向的纳米光敏免疫复合药物，其特征在于，所述光敏剂包括：吲哚菁绿、新吲哚菁绿或吲哚七甲川菁。

4.一种权利要求1-3任一项所述的一种线粒体靶向的纳米光敏免疫复合药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤A：分别制备线粒体靶向共聚物及免疫佐剂共聚物，具体操作如下：

制备线粒体靶向共聚物：

将含有苯基膦基团和羧基基团的亲脂性化合物溶解于氯仿中，搅拌条件下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺和三乙胺，室温下反应2～6小时，再加入氨基功能化的磷脂聚乙二醇，搅拌均匀，室温下反应18～24小时，待反应完成后，将混合溶液经过旋转蒸发处理，旋转蒸发温度28～39℃，待旋转蒸发完成得到样品，然后用蒸馏水溶解样品得到亲脂性阳离子共聚物溶液；

制备免疫佐剂共聚物：

将巯基功能化的CpG ODN和马来酰亚胺功能化的磷脂聚乙二醇分别溶解于Tris-HCl缓冲液制得浓度为8～15mg/mL的CpG ODN溶液和浓度为0.5～1mg/mL的马来酰亚胺功能化的磷脂聚乙二醇溶液，上述所用Tris-HCl缓冲液的pH在为6.8～8.5范围内，然后将巯基功能化的CpG ODN溶液和马来酰亚胺功能化的磷脂聚乙二醇溶液混合均匀，得到混合溶液中巯基功能化的CpG ODN与马来酰亚胺功能化的磷脂聚乙二醇的质量比为1∶1～1∶10，将混合溶液在室温下避光反应4～8小时，反应完成后进行离心处理，离心处理完成后通过清洗操作去除多余的反应物，制得免疫佐剂共聚物溶液；所述磷脂为磷脂酰乙醇胺；

步骤B：将水溶性碳基纳米粒子超声溶解于水中，调节溶液的pH值在6.8～8.5范围内，制得纳米载体溶液，然后将步骤A制得的线粒体靶向共聚物和免疫佐剂共聚物分别与所述纳米载体溶液中反应进行吸附，其中：线粒体靶向共聚物与水溶性碳基纳米载体的质量比为：1∶1，免疫佐剂共聚物与水溶性碳基纳米载体的质量比为：1∶40～1∶60，制得负载有线粒体靶向共聚物和免疫佐剂共聚物的纳米载体溶液；所述水溶性碳基纳米粒子为纳米氧化石墨烯；

步骤C：在避光条件下，将光敏剂溶解于水或二甲亚砜制得光敏剂溶液，然后将光敏剂溶液加入到完成步骤B后负载有线粒体靶向共聚物和免疫佐剂共聚物的纳米载体溶液中，充分混合后，在室温下振荡培养10～18小时，反应完成后，将溶液离心处理后清洗以除去多余光敏剂，制得负载有线粒体靶向共聚物、免疫佐剂共聚物和光敏剂的纳米载体溶液，经冷冻干燥即可得到线粒体靶向的纳米光敏免疫复合药物。

5.线粒体靶向的纳米光敏免疫复合药物在制备药物中的应用，其特征在于，基于权利要求1-3任一项所述的线粒体靶向的纳米光敏免疫复合药物实现，通过瘤内给药或者静脉给药至生物体内，采用波长为620～1100nm的激光中任一种照射5～20分钟，照射激光的功率密度为0.25～2W/cm²。