[发明专利]白色念珠菌场发射扫描电子显微镜样品的快速制备方法

权利要求书

1.白色念珠菌场发射扫描电子显微镜样品的快速制备方法，包括以下过程：

将冷藏存于4℃冰箱中固体斜面上的白色念珠菌菌株挑出后，在超净工作台里接种于固体马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，划线并培养于30℃的恒温培养箱中培养12h后，挑取培养皿上单菌落至液体普通肉汤培养基里于30℃的空气浴振荡器中以200rpm培养12～24h，得到白色念珠菌菌悬液；

其特征在于，将白色念珠菌菌悬液以8000rpm离心3～5min后，弃掉上清液，获得白色念珠菌菌体进行以下操作：

(1)将白色念珠菌菌体加入到2.5％戊二醛固定液中于4℃冰箱单固定4h；

(2)采用无菌去离子水清冼2～3次；

(3)不同浓度梯度的叔丁醇脱水，叔丁醇质量浓度依次为30％、50％、70％、85％、95％，各1次，5min/次，然后用100％叔丁醇脱水2次，15min/次，其中：每次脱水后均需以8000rpm、3～5min离心弃掉上清液；再转入至下一种试剂，每次用移液枪吹打3～5次，打散菌块；

(4)真空干燥：将离心浓缩后的菌液滴入到纯叔丁醇中在4℃冰箱冷冻10min后，放入至真空干燥箱内干燥；

(5)离子溅射喷金：待干燥后的样品温度升到室温后取出倒入至培养皿，轻摇分散菌体；采用碳导电胶带一面粘在盖玻片上，另一面倒扣轻压在菌体粉末上，翻正后用镊子将菌体刮薄铺平；离子溅射喷金后，调整并设置参数即可进行扫描电镜来观察菌体生物膜的形态结构。

2.根据权利要求1所述的白色念珠菌场发射扫描电子显微镜样品的快速制备方法，其特征在于，所述的离子溅射喷金条件：真空度10Pa，电流15mA，镀膜时间130s，镀膜的厚度为10nm；样品台与金靶之间的距离5cm。