[发明专利]基于HPLC-MS/MS检测平台的溶血磷脂酰胆碱的绝对定量分析方法

说明书

本发明公开了一种基于HPLC‑MS/MS检测平台的溶血磷脂酰胆碱的绝对定量分析方法。本发明建立了HPLC‑MS/MS检测平台，以利血平为内标物绘制LPC 14:0‑LPC 18:0系列物质检测的标准曲线，并对检测平台的线性、精密度和准确度进行验证，并检测血清的基质效应。验证结果表明本发明建立的HPLC‑MS/MS检测平台针对人血清中LPC物质的检测稳定性和准确性较高，满足临床需求，适于临床推广。

技术领域

本发明属于医学检测领域，涉及一种溶血磷脂酰胆碱的绝对定量分析方法，具体涉及一种基于HPLC-MS/MS检测平台的溶血磷脂酰胆碱的绝对定量分析方法。

背景技术

HBV相关性HCC是我国最常见的肝癌类型，也是HCC的发生发展是一个涉及多个信号通路和代谢通路异常改变的复杂病理过程，在此过程中多种物质的代谢水平发生变化，这些变化的代谢物具有潜在诊断、疾病分期和预后的临床价值。其中LPC类物质被多次报道与HCC具有某种关系。

溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholi ne，LPC)是氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipopro2 tei ox2LDL)的主要成分，是磷脂分解代谢的主要产物之一，在人体血清中的含量亦随之变化，此变化与肝脏疾病的种类和严重程度相关。为了研究LPC类物质在HBV-HCC发生发展过程中的变化趋势，探索可能的病理机制，并分析潜在的临床应用，首要的任务是精确定量LPC类物质。

目前最常用的代谢组学技术是质谱技术(mass spectrometry，MS)和核磁共振技术(nuclear magnetic resonance，NMR)，而MS最常用的分析方法是气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)、液相色谱-质谱联用(liquidchromatography-mass spectrometry，LC-MS)和毛细管电泳-质谱联用(capillaryelectrophoresis coupled to mass spectrometry，CE-MS)。NMR、GC-MS、LC-MS和CE-MS可谓是目前代谢组学分析技术的四大支柱。LC-MS适用的待检代谢物范围较广，涉及极性糖类分子、非芳香族有机酸和各种脂类等物质。LC-MS联用平台同时具有较高的特异性和敏感性，是目前定量检测微量非挥发性分析物的金标准。由于LPC类物对热不稳定，且不易挥发，适用于LC-MS技术定量分析检测。使用LC/MS进行定量分析时，需要借助于内标或外标绘制标准曲线，原始信号强度或峰面积可以转换为代谢物浓度。因为原始信号强度取决于质谱仪的条件和源于样品基质的离子抑制程度的大小。但是，为所有的代谢物均绘制对应的标准曲线或找到一种普适性的内标物质是不太现实的，所以大量的非靶向代谢研究和广谱靶向代谢研究使用原始数据中的离子强度来表示代谢物水平的高低，也就是只能进行相对定量。目前已有研究试图采用简化的标准化方法(例如通用内标物)来解决定量难题，但是其质量控制和性能验证的结果并不令人满意。由于LC-MS技术本身存在的缺陷不能广泛在临床中推广应用于LPC类物质的检测。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种用于人血清中LPC14:0、LPC 15:0、LPC 16:0、LPC 17:0、LPC 18:0五种物质的绝对定量分析的方法。本研究利用HPLC-MS/MS分析平台、以利血平为内标物质，构建了完全定量分析检测人血清中LPC14:0、LPC 15:0、LPC16:0、LPC 17:0和LPC 18:0的方法，绘制每种目标溶血磷脂酰胆碱对应的标准曲线；并进一步验证了该方法平台的定量限、线性范围，通过加标回收实验评价其准确性和血清基质对结果的影响，分析计算该平台检测的偏倚以评价其精密度，最终成功建立了一个稳定的、灵敏而可靠的定量检测人血清中LPC 14:0-LPC 18:0五种目标LPC类物质的检测平台。

具体的，本发明采用了如下技术方案：