[发明专利]一种无病毒栝楼的培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物培育领域，具体而言，涉及一种无病毒栝楼的培养方法。

背景技术

栝楼，葫芦科栝楼属多年生草本植物，别名瓜蒌、吊瓜、野葫芦等。《中华医药》记载，其果实、根是常用的名贵中药，栝楼有解热止渴、利尿、镇咳祛痰等作用。种子含脂花肪油；果实含三萜皂苷、有机酸、树脂、糖类、色素；根含蛋白质、皂苷、酸类。栝楼是治疗肺热、肿痛的特效药，近些年发现其还有调节免疫、抗心肌缺血、抗癌抗衰老等医疗和保健作用。

目前，栝楼的繁殖主要为无性繁殖方式，即采用块根小段无性繁殖；但栝楼在无性繁殖过程中，容易感染病毒，使优良品种退化。因此，为培育无病毒的栝楼优良种系，特提出本专利技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无病毒栝楼的培养方法，该培养方法易于控制实施，可在较短的时间内繁殖得到大量的无病毒的优良种系，提高栝楼种苗的品质。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种无病毒栝楼的培养方法，其包括：

取栝楼苗的茎尖分生组织，将带有1～2个叶原基的茎尖接种到第一培养基中进行培养，直至培养出含20～30个小芽的芽丛；

将芽丛转入第二培养基中，培养至长出1～2cm的丛生苗后，将丛生苗分成单株并转入第三培养基中进行生根培养，得到组培苗。

一种栝楼的脱毒培养方法，其包括：

取栝楼苗的茎尖分生组织，将带有1～2个叶原基的茎尖接种到第一培养基中进行培养，直至培养出含20～30个小芽的芽丛；其中，第一培养基是由MS培养基与0.45～0.55mg/L的6-苄氨基嘌呤、以及0.04～0.06mg/L的萘乙酸混合后形成的。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本公开内容提供的这种无病毒栝楼的培养方法，采用带有1～2个叶原基的茎尖进行愈伤组织培养，使其生长、分化形成无病毒的栝楼苗。该方法是基于病毒在植物体内分布不均匀的理论，即植物的茎尖分生组织一般不带病毒的，所以通常采用0.1毫米左右的茎尖分生组织，带1-2个叶原基，进行培养，即可得到无病毒种苗，故而无需进行病毒鉴定工作即可进行扩大繁殖。

该培养方法易于控制实施，操作相对较简单，成苗时间短，可在较短的时间内繁殖得到大量的无病毒的优良种系，提高栝楼种苗的品质。通过这种培养方法培育的无病毒栝楼，具有生长健壮、不带病毒、品质优良的特性，从而大幅提高栝楼药材的质量和药效。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

本实施方式提供一种无病毒栝楼的培养方法，其包括下述步骤：

步骤S1初代培养：取栝楼苗的茎尖分生组织，将带有1～2个叶原基的茎尖接种到第一培养基中进行培养，直至培养出含20～30个小芽的芽丛。

在本实施方式中，栝楼苗既可以为无菌苗，也可以为大田两年生的正常苗，都可以满足初代培养的植株取材需求。较为具体的，将栝楼苗在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有1～2个叶原基的茎尖为度，茎尖分离后，迅速接入第一培养基中。

值得强调的是，由于本实施方式提供的培养方法，选用的植物组织为茎尖分生组织，该分生组织一般不带病毒，所以采用0.1毫米左右的带1～2个叶原基的茎尖分生组织，进行培养，即可得到无病毒苗，故而无需进行病毒鉴定工作即可进行扩大繁殖。

可选择的，培养茎尖的条件为：环境温度23～28℃、日照时间13～14h、光照强度1200～1300LX、相对湿度75～85％。进一步优选的，培养茎尖的条件为：环境温度24～27℃、日照时间13.4～13.7h、光照强度1230～1280LX、相对湿度78～82％；更为具体的培养条件为：环境温度25℃、日照时间13.5h、光照强度1250LX、相对湿度80％。在这些条件下，进行茎尖分生组织的培养，茎尖所处的环境适宜，生长和分化速度快，能够在相对较短的时间内长出小芽，形成芽丛，发芽率高、培养周期短。

进一步的，第一培养基是由MS培养基与0.45～0.55mg/L的6-苄氨基嘌呤、以及0.04～0.06mg/L的萘乙酸混合后形成的；或者第一培养基是由MS培养基与0.5mg/L的6-苄氨基嘌呤、以及0.05mg/L的萘乙酸混合后形成的。