[发明专利]一种产chloroeremomycin的基因工程菌及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种产chloroeremomycin的基因工程菌，所述基因工程菌是将菌株CGMCC NO.3053的vca基因敲除，并导入eva基因构建获得。本发明还提供了所述产chloroeremomycin的基因工程菌用于发酵生产chloroeremomycin的应用。本发明构建的基因工程菌能大幅提高chloroeremomycin的产量、缩短发酵时间，具有广泛的工业应用前景。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体地说，是关于一种产chloroeremomycin的基因工程菌及其制备方法和应用。

背景技术

随着万古霉素的使用越来越频繁，万古霉素耐药菌也已出现，自20世纪80年代万古霉素耐药性肠球菌被首次报道以来，耐药菌呈现不断增长的趋势，在世界范围内已引起数次医院内爆发流行，而且许多万古霉素耐药性肠球菌还对其他抗生素(如β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素)耐药，因此迫切需要进一步研制和开发新的或者抗菌活性更强的抗生素。但是目前的现状是，许多已被发现的天然化合物重复被发现，新的天然化合物的发现受阻，而且，由于化合物结构的限制使得分离纯化方法有待提高，这些因素还会使前期的开发成本变得很高，使得投资人望而却步，现在以基因工程为基础的组合生物合成方法为此打开了一扇窗。

中国专利CN200910053906.9公开了一株基因工程菌CGMCC NO.3053，其为利用万古霉素合成途径将从Amycolatopsis balhimyceticus NRRL B-24207中钓取到的糖基转移酶基因通过接合转移的方法异源置换到万古霉素产生菌Amycolatopsis orientalisHCCB10007中而获得，产生比万古霉素多一个万古糖胺的三糖化合物LYV07WW01。该化合物与Chloroeremomycin结构类似。所述CGMCC NO.3053工程菌的起始来源的菌株的基因组已公开，genbank数据库登记号为CP003410.1，其中含有vca基因，该基因包含万古糖胺生物合成相关的四个基因，分别编码NDP-己糖2,3-脱水酶(AORI_1498)、C-4-酮基还原酶(AORI_1499)、C-3-氨基转移酶(AORI_1500)及差向异构酶(AORI_1501)。

Chloroeremomycin(结构式如图1所示)，又叫LY264826，A82846B或者chloroorienticin A，是美国礼来公司于1987年发现的一种重要的糖肽类抗生素，文献报导Chloroeremomycin具有抗MRSA、耐万古霉素肠球菌的活性，目前该化合物作为起始原料用于生产抗感染新药奥利万星。Chloroeremomycin的产生菌为东方拟无枝 酸菌A.orientalis NRRL 18098，其基因组genbank登记号为AJ223998.1，其中含有eva基因，该基因包含表万古糖胺生物合成相关的四个基因，分别编码NDP-己糖2,3-脱水酶(CDS 15)、C-4-酮基还原酶(CDS 16)、C-3-氨基转移酶(CDS 17)及差向异构酶(CDS 18)。该菌生长周期长，种子培养需要48小时，且Chloroeremomycin的产量低，发酵260h后，Chloroeremomycin的产量为100～150mg/L(US5843437A、CN104805161A)。

因此，亟待开发更多有价值的chloroeremomycin衍生抗生素，以大幅提高chloroeremomycin的产量。

发明内容

本申请的发明人采用基因工程方法，在对CGMCC NO.3053进行基因工程改造以构建产chloroeremomycin的基因工程菌中发现，以CGMCC NO.3053为出发菌株，对其中的vca基因进行敲除，并插入eva基因，可以构建一种能大幅提高chloroeremomycin产量、缩短发酵时间的基因工程菌，从而解决了现有的东方拟无枝酸菌NRRL 18098发酵时间长、产量低的问题。

因此，本发明的第一个目的在于，提供一种产chloroeremomycin的基因工程菌。

为了达到上述目的，本发明提供了如下的技术方案：