[发明专利]一种产chloroeremomycin的基因工程菌及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种产chloroeremomycin的基因工程菌，其特征在于，所述产chloroeremomycin的基因工程菌是将菌株CGMCC NO. 3053的vca基因敲除，并导入eva基因构建获得，所述vca基因如Genebank 登记号CP003410.1中AORI_1498至AORI_1501所示，所述eva基因为表万古糖胺生物合成相关的四个基因，分别为Genebank 登记号AJ223998.1中CDS15所示的编码NDP-己糖2,3-脱水酶的基因、CDS16所示的编码C-4-酮基还原酶的基因、CDS17所示的编码C-3-氨基转移酶的基因、以及CDS18所示的编码差向异构酶的基因。

2.如权利要求1所述的产chloroeremomycin的基因工程菌，其特征在于，所述eva基因来源于菌株A. orientalis NRRL18098。

3.一种如权利要求1所述的产chloroeremomycin的基因工程菌用于发酵生产chloroeremomycin的应用。

4.一种chloroeremomycin的生产方法，其特征在于，通过发酵生产权利要求1的产chloroeremomycin的基因工程菌获得chloroeremomycin。

5.一种如权利要求1所述的产chloroeremomycin的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法是以CGMCC NO. 3053为出发菌株，将菌株CGMCC NO. 3053的vca基因敲除，并导入eva基因，构建获得所述的产chloroeremomycin的基因工程菌。

6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、CGMCC NO. 3053 Δvca菌株的构建：以东方拟无枝酸菌CGMCC NO. 3053为出发菌株，构建敲除vca基因的CGMCC NO. 3053 Δvca菌株；

步骤二、重组质粒pLY-eva的构建：从A. orientalisNRRL 18098菌株中钓取eva基因，构建重组质粒pLY-eva；

步骤三、重组菌株HCCB13460的构建：将步骤二获得的重组质粒pLY-eva插入到步骤一获得的CGMCC NO. 3053 Δvca中，获得含有eva基因的重组菌株HCCB13460，即为所述的产chloroeremomycin的基因工程菌。

7.一种如权利要求6所述的构建方法，其构建方法包括：敲除质粒pLY-Δvca的构建：利用引物vca-up-F、vca-up-R、vca-down-F和vca-down-R钓取A. orientalisCGMCC NO. 3053中万古糖胺合成基因的上游基因和下游基因片段，拼接成长片段，并整合上抗性标记构成敲除质粒pLY-Δvca，所述vca-up-F如SEQ ID NO:1所示，所述vca-up-R如SEQ ID NO:2所示，vca-down-F如SEQ ID NO:3所示，所述vca-down-R如SEQ ID NO:4所示。