[发明专利]绿色木霉生产纤维素酶的方法及所产纤维素酶的应用

权利要求书

1.一种绿色木霉生产纤维素酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a）将绿色木霉菌种接到PDA培养基中，在28-35℃的恒温条件下培养3-4 d；

b）将浓度为0.2-1%的Tween-80添加入所述PDA培养基中，所述Tween-80与所述绿色木霉菌种的体积比为0.3-2；

c）制备固体发酵培养基，将甘蔗渣粉末、麸皮和盐液混合置于121 ℃环境下灭菌20 min，所述甘蔗渣粉末的质量份为4-6份，所述麸皮的质量份为4-6份，所述盐液为质量浓度为0.04%的（NH₄）₂SO₄、3%的KH₂PO₄、0.5%的MgSO₄·7H₂O、0.05%的CaCl₂的混合溶液，所述盐液的质量份为30-40份；

d）将生理盐水倒入活化的绿色木霉中，得到孢子液；将所述孢子液移入所述固体发酵培养基中，再将装有所述孢子液的所述固体发酵培养基放到摇床条件下培养；

e）上述步骤完成后，向所述固体发酵培养基中加入蒸馏水，进行摇床处理，再经过纱布过滤后取溶液进行离心处理，所得上清液即为纤维素酶液。

2.根据权利要求1所述的绿色木霉生产纤维素酶的方法，其特征在于：步骤d）中，生理盐水摇床培养条件为培养温度为28-35 ℃、转速为160-200 r/min、培养时间为3-4d。

3.根据权利要求1所述的绿色木霉生产纤维素酶的方法，其特征在于：步骤e）中，所述蒸馏水按v/m为 15: 1-22:1的比例添加；摇床温度为28-35 ℃，处理时间为45-65 min；过滤纱布为6-10层；离心转速为4000-7000 r/min，离心时间为8-15 min。

4.根据权利要求1所述的绿色木霉生产纤维素酶的方法，其特征在于：所述甘蔗渣粉末经过酸处理或碱处理或先酸处理再碱处理或先碱处理再酸处理。

5.根据权利要求4所述的绿色木霉生产纤维素酶的方法，其特征在于：所述甘蔗渣粉末的酸处理的处理步骤为：取过80目筛的甘蔗渣粉末于容器中，加入2%浓度的H₂SO₄，所述稀H₂SO₄与所述甘蔗渣粉末的比例v/m为8：1-10：1，室温下静置处理2-3 h，抽滤进行固液分离，蒸馏水洗涤残渣至中性后烘干。

6.根据权利要求4所述的绿色木霉生产纤维素酶的方法，其特征在于：所述甘蔗渣粉末的碱处理的处理步骤为：取过80目筛的甘蔗渣粉末于容器中，加入10%浓度的氨水，所述氨水与所述甘蔗渣粉末的比例v/m为8：1-10：1，室温下静置处理20-26 h，抽滤进行固液分离，蒸馏水洗去残留在滤渣中的氨后烘干。

7.根据权利要求4所述的绿色木霉生产纤维素酶的方法，其特征在于：所述甘蔗渣粉末的先酸处理再碱处理的处理步骤为：取过80目筛的甘蔗渣粉末于容器中，加入2%浓度的H₂SO₄，所述稀H₂SO₄与所述甘蔗渣粉末的比例v/m为8：1-10：1，室温下静置处理2-3 h，抽滤进行固液分离，然后再加入10%浓度的氨水，所述氨水与所述甘蔗渣粉末的比例v/m为8：1-10：1，室温下静置处理20-26 h，抽滤进行固液分离，蒸馏水洗去残留在滤渣中的氨后烘干。

8.根据权利要求4所述的绿色木霉生产纤维素酶的方法，其特征在于：所述甘蔗渣粉末的先碱处理再酸处理的处理步骤为：取过80目筛的甘蔗渣粉末于容器中，加入10%浓度的氨水，所述氨水与所述甘蔗渣粉末的比例v/m为8：1-10：1，室温下静置处理20-26 h，抽滤进行固液分离，蒸馏水洗去残留在滤渣中的氨，然后再加入2%的稀H₂SO₄，所述稀H₂SO₄与所述甘蔗渣粉末的比例v/m为8：1-10：1，搅拌均匀，于室温下静置处理2-3 h，抽滤进行固液分离，蒸馏水洗涤残渣至中性后烘干。