[发明专利]一种包埋活性肽的纳米颗粒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纳米颗粒及其制备方法，特别涉及一种包埋活性肽的纳米颗粒及其制备方法。

背景技术

近年来，食源性活性肽因其安全性高，又能够为人体提供氨基酸，调节某些生理机能，越来越受到人们的关注。

鸡蛋，因其具有非常高的营养价值和蛋白质生物利用率而历来被人们所青睐。我国是蛋品生产和消费大国，蛋品的生产量和消费量已连续多年世界第一，但是蛋品深加工还是以蛋壳为主，蛋品深加工程度仍然较低，尤其在功能性蛋制品方面发展严重不足，不能满足日益扩大的市场需求。

鸡蛋清中蛋白质含量较多，含有8种人体必需氨基酸，是获取生物活性肽的良好蛋白质资源。蛋清蛋白被酶解后得到由氨基酸组成的多个肽段，即蛋清源活性肽，蛋清源活性肽具有独特的体内或体外生物活性，营养价值高，生物活性多样，几乎无毒副作用等优点，但由于其在体内胃肠道消化系统中极易被降解而不能以完整形式被吸收，而蛋清源活性肽要在体内发挥生物活性就必须通过胃肠道复杂的消化酶降解，然后以完整形式透过小肠上皮吸收渗透屏障，被机体完整吸收后，再通过血液循环等输送到作用靶点，且积累到一定的量才有可能最终实现其发挥调节生理功能的作用。因此，开发一种对蛋清源活性肽进行有效保护的技术手段以提高其稳定性和体内吸收利用率迫在眉睫。

壳聚糖(Chitosan)，化学名称为聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖，是由甲壳素经脱乙酰作用得到的。是自然界中除纤维素外含量最高的多糖，因其无毒、易降解、生物活性多样、能被生物体完全吸收而在医药、食品、化工等领域内有广泛的应用。利用壳聚糖作为纳米包材对蛋清源活性肽进行包埋保护具有重要意义。

随着研究者对蛋清源活性肽功能活性和结构特性研究的逐渐深入，如何确保其以完整形式被机体吸收也成为了一个亟需解决的难题，但目前国内外对蛋清源活性肽通过纳米包埋的形式提高其稳定性和体内生物利用率的相关专利和论文文献几乎没有。

发明内容

本发明的目的是解决现阶段蛋清源活性肽在体内胃肠道消化系统中极易被降解而不能以完整形式被吸收的问题，提供的一种包埋活性肽的纳米颗粒及其制备方法。

本发明提供的包埋活性肽的纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、蛋清源活性肽的制备：取一定量蛋清蛋白粉，按料液质量比为1:10～1:100配制成蛋清蛋白粉原料液，加热至80℃～100℃，持续5min～20min，进行变性处理，然后冷却至30℃～50℃，调节pH值至8～10，加入碱性蛋白酶，持续水解100min～300min后，进行沸水浴灭酶，最后离心处理，取上清液，进行超滤膜过滤、冻干，得到蛋清源活性肽样品；

步骤二、壳聚糖-三聚磷酸钠纳米颗粒的制备：采用离子凝胶法，即称取一定量壳聚糖，通过降解法将壳聚糖溶解于0.1wt％～10wt％的乙酸溶液中，使其浓度为0.01mg/mL～4mg/mL,按壳聚糖与三聚磷酸钠的质量比为10:1～1:1的比例，加入一定量浓度为0.1mg/mL～1mg/mL的三聚磷酸钠溶液，搅拌，调节pH值至1～7，测量其粒径和电势分布情况，得到粒径＜200nm，电势大于30mV，稳定性良好的壳聚糖-三聚磷酸钠纳米颗粒溶液；

步骤三、蛋清肽-壳聚糖纳米颗粒的制备：按照蛋清源活性肽：壳聚糖的质量比为20:1～1:10，取一定量的由步骤一制得的蛋清源活性肽，搅拌状态下加入到一定量的由步骤二制得的壳聚糖溶液中，搅拌1min～10min后进行超声波处理1min～20min，加入步骤二中得到的对应体积的三聚磷酸钠溶液，调节pH值至2～7，测量其粒径和电势分布情况，得到粒径＜200nm，电势大于30mV，稳定性良好的蛋清肽-壳聚糖纳米颗粒溶液。

步骤一中用1M氢氧化钠溶液调节pH值至8～10。

步骤一中加入碱性蛋白酶的量是蛋清蛋白粉质量的1％～10％。

步骤一中超滤膜为分子量分别是10K、3K和1K的超滤膜，将上清液依次经过分子量为10K、3K和1K的超滤膜过滤后，得到分子量分别为＜10KDa的活性肽、10KDa～3KDa、3KDa～1KDa和＜1KDa的四种蛋清源活性肽。

步骤二中使用的壳聚糖分子量为150KDa。

步骤二中降解法采用声波降解法。

步骤二中壳聚糖的初始浓度为0.01mg/mL～4mg/mL。

步骤二中壳聚糖与三聚磷酸钠的质量比为10:1～1:1。

步骤二中制备蛋清肽-壳聚糖纳米颗粒时，添加顺序为将将蛋清肽加入壳聚糖溶液中，经搅拌超声后加入三聚磷酸钠。