[发明专利]貉犬瘟热冻干活疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种貉犬瘟热冻干活疫苗及其制备方法和应用，属于兽用生物制品技术领域。本发明的一种貉犬瘟热冻干活疫苗，其有效成分为貉犬瘟热病毒弱毒疫苗株，该弱毒疫苗株是本发明发明人通过貉体连续传代的方式，从犬瘟热疫苗株CDV‑O2中驯化获得的一株对貉安全、免疫原性良好、滴度稳定的犬瘟热弱毒疫苗株，命名为CDV‑OR12株，其微生物保藏号为CGMCC NO.13793。实验证明，该疫苗可有效保护貉免于犬瘟热病毒强毒的攻击，保护率在90％以上，能够有效预防貉犬瘟热的发生，免疫期为6个月。本发明的提出为貉犬瘟热的防控提供了一种新的技术手段。

技术领域

本发明涉及一种貉犬瘟热冻干活疫苗及其制备方法和应用，本发明属于兽用生物制品技术领域。

背景技术

犬瘟热是由副黏病毒科麻疹病毒属犬瘟热病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，幼龄动物多为急性、致死性经过，成年动物可成慢性、持续性感染，临床症状以双相体温升高，伴有卡他性肺炎、胃肠炎为主要特征，偶有神经症状出现，容易继发其他细菌病毒的混合感染和二次感染，死亡率可高达80％，是危害我国毛皮动物养殖业的最严重的疫病之一。

貉犬瘟热全年任何季节都能够发生，尤其是仔貉在断乳前后以及育成期更加敏感，具有非常高的发病率和死亡率，老龄貉具有一定的抵抗力。带毒动物是貉犬瘟热的主要传染源，通过眼及鼻分泌物、唾液、尿、粪便排出病毒，主要经消化道、呼吸道传染。由于貉犬瘟有发病急、缺乏特效治疗方法的特点，貉犬瘟热仍以疫苗接种作为主要的防控手段，然而目前市场上并没有貉犬瘟热疫苗销售，很多养殖户以犬、水貂等动物的犬瘟热疫苗用以预防貉犬瘟热，无法取得较好的免疫保护效果。因此，开发安全、免疫效果良好的貉犬瘟热疫苗，不仅是行业和市场的迫切需求，具有广阔的市场应用前景，对于防控貉犬瘟热具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种貉犬瘟热冻干活疫苗及其制备方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明通过貉体连续传代的方式，人工驯化了犬瘟热疫苗株CDV-O2，获得了一株对貉安全、免疫原性良好、滴度稳定的犬瘟热病毒弱毒疫苗株CDV-OR12，并以此毒株制备了貉犬瘟热冻干活疫苗。

本发明的一种貉犬瘟热冻干活疫苗，其有效成分为貉犬瘟热病毒弱毒疫苗株，所述的貉犬瘟热病毒弱毒疫苗株命名为CDV-OR12株，分类命名为犬瘟热病毒CanineDistemper virus，该疫苗株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，微生物保藏号为CGMCCNO.13793，保藏时间为2017年04月21日。

在本发明所述的貉犬瘟热冻干活疫苗中，优选的，所含有的貉犬瘟热病毒弱毒疫苗株的含量TCID₅₀≥10^4.5/头份，更优选的，所含有的貉犬瘟热病毒弱毒疫苗株的TCID₅₀为10^4.5-10^5.5/头份。

在本发明所述的貉犬瘟热冻干活疫苗中，优选的，还包括冻干保护剂，所述的冻干保护剂中包括明胶、水解乳蛋白和蔗糖。

进一步的，本发明还提出了一种制备所述貉犬瘟热冻干活疫苗的方法，其包括以下步骤：

(1)取所述的貉犬瘟热病毒弱毒疫苗株CDV-OR12株以吸附接毒的方式接种Vero细胞上进行病毒扩增培养，每日观察细胞病毒情况，待细胞病变达到75-85％时通过反复冻融的方法收获病毒液，并进行病毒含量、纯净性检验，将检验合格的病毒液保存于-20℃；

(2)将明胶、水解乳蛋白和蔗糖溶解于水中，按照质量百分比计，使明胶的终浓度为2～7％，水解乳蛋白的终浓度为10～25％，蔗糖终浓度为15～30％，于116℃、20min高压灭菌后得到冻干保护剂；