[发明专利]基于CHO细胞表达系统的重组猪瘟E2蛋白的纯化方法及应用

权利要求书

1.一种基于CHO细胞表达系统的重组猪瘟E2蛋白的纯化方法，所述纯化方法包括以下步骤：

1)利用flux仪器以及中空纤维柱澄清CHO细胞培养液，以除去细胞和细胞碎片；以及

2)利用flux仪器以及中空纤维柱将步骤1)中澄清后的细胞培养液进行切向流过滤处理，以除去杂质后得到纯化后的重组猪瘟E2蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中的中空纤维柱是0.2μm中空纤维柱。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，利用flux仪器和中空纤维柱澄清CHO细胞培养液的方法包括以下步骤：

1-1)安装Filter，并用dd H₂O清洗仪器管道和中空纤维柱，直至流出液体pH为7；

1-2)仪器校准和测试，其中，校准包括Feed pump校准和Permeate pump校准，测试包括管路泄露测试和Fliter水通量测定；

1-3)系统平衡：用缓冲液平衡整个系统管路及Fliter 5min，然后转移多余缓冲液；

1-4)样品澄清：

1-4-1)将CHO细胞培养液加入到tank中，启动Feed泵到4000S-1，循环一定时间后经0.2μm中空纤维柱微滤，收集透过液，待用；

1-4-2)然后将缓冲液加入tank中的细胞培养液中，重悬，其中缓冲液与细胞培养液的体积比为1:1；开启Feed泵一定时间，收集透过液，得到第一批澄清液，待用；

1-4-3)重复步骤1-4-2)2次，共得到3批澄清液；

1-4-4)将上述透过液以及三批澄清液混合均匀，得到澄清后的CHO细胞培养液；以及

1-5)Filter的清洗和保存，使用缓冲液清洗Filter，清洗完毕后使用0.1M NaOH溶液保存Filter。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中的中空纤维柱是30kD中空纤维柱。

5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，利用flux仪器和中空纤维柱进行切向流过滤处理澄清后的CHO细胞培养液的方法包括以下步骤：

2-1)安装Filter，并用dd H₂O清洗仪器管道和纤维柱，直至流出液体pH为7；

2-2)仪器校准和测试，其中校准包括Feed pump校准和Transfer pump校准，测试包括管路泄露测试和Fliter水通量测定；

2-3)系统平衡：用缓冲液平衡整个系统管路及Fliter约5min，然后转移多余缓冲液；

2-4)将装有缓冲液的容器连接Transfer pump，缓冲液通过Transfer pump泵入tank中；

2-5)切向流过滤处理：

2-5-1)将澄清后的CHO培养液加入到tank中，启动Mixer，运行2-5min；

2-5-2)启动Feed泵，使其达到6,000S-1，打开Retentate valve，待系统全回流5-10min后，适当调节Retentate valve使TMP达到14.5，以透过流速V1收集Permeate液体；

2-5-3)打开Transfer pump，缓冲液以流入流速V2流入tank中，其中，所述透过流速V1与所述流入流速V2相同；

2-5-4)收集Permeate液体最少直到6倍样品体积时为止，此时tank中剩余液体为纯化后的猪瘟E2蛋白；以及

2-6)Filter的清洗和保存，使用缓冲液清洗Filter，清洗完毕后使用0.1M NaOH溶液保存Filter。

6.根据权利要求3或5所述的方法，其特征在于，所述缓冲液为0.01M PBS。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述切向流过滤处理时每次泵入的缓冲液体积与样品体积相同。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述切向流过滤处理的次数为6次以上。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述透过流速V1为2ml/min。

10.一种利用权利要求1～9任一权利要求所述的方法纯化CHO系统表达的重组蛋白的应用。