[发明专利]自闭症生物标志物及其检测试剂盒

权利要求书

1.检测肠道中的IgA水平的试剂组合在制备用于诊断自闭症的试剂盒中的用途。

2.根据权利要求1的用途，其特征在于：

所述检测肠道中的IgA水平的试剂组合包括ELISA检测试剂；

所述ELISA检测试剂包括含1μg/ml羊抗人IgA，IgG，IgM(H+L)抗体的磷酸盐缓冲液；

所述ELISA检测试剂还包括HRP标记的羊抗人IgA的溶液，其是采用品牌为Jackson且货号为109-036-011的HRP标记的羊抗人IgA以体积比1：10000稀释于含2.5％脱脂牛奶的PBS中获得；

所述ELISA检测试剂还包括含0.2％吐温-20的磷酸盐缓冲液；

所述ELISA检测试剂还包括含2.5％脱脂牛奶的磷酸盐缓冲液；

所述ELISA检测试剂还包括磷酸缓冲盐溶液；

所述ELISA检测试剂还包括TMB显色液；

所述ELISA检测试剂还包括终止液；

所述终止液为浓度为2M的H₂SO4溶液。

3.根据权利要求1的用途，其特征在于：

所述用于诊断自闭症的试剂盒的使用包括以下步骤：

获取来自受测个体肠道的第一生物样品和来自正常个体肠道的第二生物样品；

将第一生物样品和第二生物样品进行匀浆处理从而提取上清；

将上清分别进行等同稀释后进行ELISA检测；

根据ELISA检测的结果对第一生物样品和第二生物样品所含的肠道中的IgA水平进行差异显著性分析；

所述第一生物样品和第二生物样品均为肠道固体排泄物；

将第一生物样品和第二生物样品进行匀浆处理从而提取上清包括如下步骤：获取第一生物样品和第二生物样品的粪便各0.3克左右，均用两倍体积的磷酸缓冲盐溶液进行匀浆处理，然后20000g离心10分钟，取上清作为生物样本提取液；

所述ELISA检测包括如下步骤：

步骤一：在ELISA反应板中加入含1μg/ml羊抗人IgA，IgG，IgM(H+L)抗体的PBS，4℃密封孵育16小时；拍干反应板，用含0.2％吐温-20的PBS洗涤板孔，拍干反应板，再用含0.2％吐温-20的PBS洗涤板孔，拍干反应板，得到包被好的ELISA板；

步骤二：在包被好的ELISA板孔中加入75μl含2.5％脱脂牛奶的PBS和25μl生物样本提取液于反应板孔中，于37℃孵育1小时；

步骤三：用含0.2％吐温20的PBS洗涤ELISA板孔，拍干反应板，重复四次，洗板后在各反应板孔加入100μlHRP标记的羊抗人IgA的溶液于37℃孵育1小时；

步骤四：用含0.2％吐温-20的PBS洗涤板孔，拍干反应板，重复五次，洗板后在各反应板孔均加入TMB显色液100μl显色，置于37℃保温15min，然后每孔加入50μl终止液终止反应；

步骤五：分别于终止后，将各反应板置酶标仪中，读取OD450值。

4.一种用于筛选易患自闭症患者的生物样品的系统，其特征在于，包括：

匀浆处理装置，所述匀浆处理装置用于将待测样品和对照样品进行匀浆处理从而提取上清；

ELISA检测装置，所述ELISA检测装置与所述匀浆处理装置相连，用于检测待测样品和对照样品各自上清经ELISA检测试剂处理后的酶标值；以及

分析装置，所述分析装置与所述ELISA检测装置相连，基于所述酶标值对所述待测样品和所述对照样品所含的IgA水平进行差异显著性分析，根据分析结果判断所述待测样品是否来自易患自闭症患者，其中，所述待测样品肠道中的IgA总含量显著高于所述对照样品是所述待测样品来自易患自闭症患者的指示；

所述待测样品和对照样品均为肠道固体排泄物；

将待测样品和对照样品进行匀浆处理包括如下步骤：称取所述待测样品和对照样品各0.3克左右，均用两倍体积的磷酸缓冲盐溶液进行匀浆处理，然后20000g离心10分钟，取上清作为生物样本提取液；

所述检测待测样品和对照样品各自上清经ELISA检测试剂处理后的酶标值包括如下步骤：

步骤一：在ELISA反应板中加入含1μg/ml羊抗人IgA，IgG，IgM(H+L)抗体的PBS，4℃密封孵育16小时；拍干反应板，用含0.2％吐温-20的PBS洗涤板孔，拍干反应板，再用含0.2％吐温-20的PBS洗涤板孔，拍干反应板，得到包被好的ELISA板；

步骤二：在包被好的ELISA板孔中加入75μl含2.5％脱脂牛奶的PBS和25μl生物样本提取液于反应板孔中，于37℃孵育1小时；

步骤三：用含0.2％吐温20的PBS洗涤ELISA板孔，拍干反应板，重复四次，洗板后在各反应板孔加入100μlHRP标记的羊抗人IgA的溶液于37℃孵育1小时；

步骤四：用含0.2％吐温-20的PBS洗涤板孔，拍干反应板，重复五次，洗板后在各反应板孔均加入TMB显色液100μl显色，置于37℃保温15min，然后每孔加入50μl终止液终止反应；

步骤五：分别于终止后，将各反应板置酶标仪中，读取OD450值。