[发明专利]尿液中褪黑素硫酸盐的检测方法

说明书

本发明涉及一种尿液中褪黑素硫酸盐的检测方法，包括如下步骤：样品前处理：取尿液样品，加入去离子水稀释，所述尿液样品与所述去离子水的体积比为1:1‑2；然后加入内标液，所述尿液样品与所述内标液的体积比为1:1‑3，得待测样品；富集、分离和检测：对所述待测样品采用二维液相色谱串联四级杆质谱联用仪进行富集、分离和检测。上述检测方法的定量限为0.0975μg/L，检测限为0.0249μg/L，精密度RSD<11％，加标回收率在89％‑110％之间，前处理时间约1.2min，检测效率高，精密度高、灵敏度高、检测通量高、成本低。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，特别是涉及一种尿液中褪黑素硫酸盐的检测方法。

背景技术

尿液中褪黑素硫酸盐(MT6s)是褪黑素的主要代谢产物，通过检测尿液中 MT6s可以间接反映人体内MT水平。褪黑激素(Melatonine，MT)因为能使皮肤变白而得名，是由脑松果体分泌的激素之一。褪黑激素属于吲哚杂环类化合物，其化学名是N-乙酰基-5-甲氧基色胺，又称为松果体素、褪黑素。褪黑素合成后，储存在松果体内，交感神经兴奋支配松果体细胞释放褪黑素人血。褪黑素的分泌具有明显的昼夜节律，白天分泌受抑制，晚上分泌活跃。褪黑素可抑制下丘脑-垂体-性腺轴，使促性腺激素释放激素、促性腺激素、黄体生成素以及卵泡雌激素的含量均减低，并可直接作用于性腺，降低雄激素、雌激素及孕激素的含量。另外，MT有强大的神经内分泌免疫调节活性和清除自由基抗氧化能力，可能会成为新的抗病毒治疗的方法和途径。MT最终在肝脏中代谢，肝细胞的损伤可影响体内MT的水平。

目前尿液中褪黑素硫酸盐检测主要采用传统的放免法、酶联免疫、化学发光或者液相色谱的方法检测尿液样本中的褪黑素硫酸盐，鲜少有液相色谱串联质谱法，且普遍存在：1.尿液样本的运输和保存条件严格运输不方便；2.褪黑素硫酸盐浓度较低一般为ppb级别，且极性强，人体尿液组成复杂存在大量的结构相似的化合物，因此传统方法检测存在严重的基质干扰，特异性差，灵敏度低，准确度低等缺点。3.色谱或者质谱法存在前处理复杂，操作繁琐，周期长，检测通量小。

发明内容

基于此，本发明的目的是提供一种灵敏度高、特异性强、通量高的褪黑素硫酸盐的检测方法。

具体的技术方案如下：

一种尿液中褪黑素硫酸盐的检测方法，包括如下步骤：

样品前处理：取尿液样品，加入去离子水稀释，所述尿液样品与所述去离子水的体积比为1:1-2；然后加入内标液，所述尿液样品与所述内标液的体积比为1:1-3，得待测样品；

富集、分离和检测：对所述待测样品采用二维液相色谱串联四级杆质谱联用仪进行富集、分离和检测。

在其中一些实施例中，所述富集、分离和检测的步骤包括：

先用流动相1洗脱富集柱中的所述待测样品，对所述待测样品进行富集、纯化；

将富集柱与分析柱连通，用流动相2将待测物从富集柱洗脱至分析柱，用流动相2将待测物从分析柱洗脱、分离；

断开富集柱与分析柱，用流动相2将待测物从分析柱洗脱、分离至四级杆质谱进行检测；

其中，富集柱为C8柱，分析柱为C18柱；

流动相1：A相为乙腈，B相为水，流速为1.0-2.0ml/min；

流动相2：C相为含0.09-0.3wt％甲酸的乙腈，D相为含0.09-0.2wt％甲酸和 5-10mM醋酸铵的水，流速为0.2-1.0ml/min。