[发明专利]一种利用酶标记核酸适配体检测黄曲霉毒素B1的方法

说明书

本发明公开了一种利用酶标记核酸适配体检测黄曲霉毒素B1的方法。本发明提供的方法依次包括如下步骤：(1)取具有包被的微孔板，加入待测样本和特异探针共孵育，然后洗涤；(2)通过检测特异探针相应的信号实现对黄曲霉毒素B1的检测；所述具有包被的微孔板为包被有黄曲霉毒素B1‑BSA偶联物的微孔板；所述特异探针为元件甲和元件乙的结合物；元件甲为在与黄曲霉毒素B1特异结合的核酸适配体的末端借助三甘醇作为连接臂连接生物素得到的物质；元件乙为辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。本发明提供的酶联适配体分析方法具有简单、快速、灵敏度高的优势，可实现多个样品的快速分析，可做成检测试剂盒，在AFB1的分析检测中具有很大的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种利用酶标记核酸适配体检测黄曲霉毒素B1的方法。

背景技术

黄曲霉毒素(Aflatoxin)是一种真菌毒素，主要是指由黄曲霉及寄生曲霉产生的次级代谢产物。黄曲霉毒素存在于多种受污染的食品中，如玉米、谷类、酒类、坚果类、调味料及豆制品。其中，黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB1)是一种毒性最强的黄曲霉毒素，被国际癌症研究机构确认为一种最主要的致癌物。考虑到AFB1对人类健康和食品安全的威胁，及其受污染的广泛性，对AFB1的灵敏检测十分必要。

目前，诸如高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法和薄层色谱法等色谱分析方法已经被广泛应用于AFB1的定量分析。色谱分析方法具备了较高的灵敏度和准确度，但操作耗时、步骤繁琐、且需要昂贵的仪器。与此相比，免疫分析法操作简单、快速，易实现现场检测，其中基于酶反应信号放大的酶联免疫分析(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)具有较高的检测灵敏度。然而，在酶联免疫分析中，抗体存在一些局限，如免疫抗体对环境因素敏感、活性不稳定、制备成本高等，且不同批次免疫抗体产品实验间的重现性低。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用酶标记核酸适配体检测黄曲霉毒素B1的方法。

本发明提供了一种检测黄曲霉毒素B1的方法，依次包括如下步骤：

(1)取具有包被的微孔板，加入待测样本和特异探针共孵育，然后洗涤；

(2)通过检测特异探针相应的信号实现对黄曲霉毒素B1的检测；

所述具有包被的微孔板为如下(a)或(b)或(c)：

(a)包被有黄曲霉毒素B1-BSA偶联物的微孔板；

(b)包被有黄曲霉毒素B1和载体蛋白的偶联物的微孔板；

(c)包被有黄曲霉毒素B1的酶标板；

所述特异探针为特异探针甲或特异探针乙或特异探针丙；

所述特异探针甲为元件甲和元件乙的结合物；所述元件甲为在与黄曲霉毒素B1特异结合的核酸适配体的末端借助三甘醇作为连接臂连接生物素得到的物质；所述元件乙为辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素；

所述特异探针乙为在与黄曲霉毒素B1特异结合的核酸适配体的末端连接辣根过氧化物酶得到的物质；

所述特异探针丙包括亲和配体和酶分子标记；所述亲和配体为与黄曲霉毒素B1特异结合的核酸适配体。

所述特异探针甲中，所述末端具体可为5'末端。所述特异探针甲中，元件甲和元件乙的结合为非共价结合。

所述特异探针乙中，所述连接可为直接连接也可为借助连接臂连接。所述特异探针乙中，所述连接可为共价连接和可为非共价连接。所述特异探针乙中，所述末端具体可为5'末端。

所述与黄曲霉毒素B1特异结合的核酸适配体具体如序列表的序列1所示。

所述共孵育的条件具体可为：室温静置孵育30分钟。