[发明专利]一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学材料领域，具体涉及一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵及其制备方法和应用。

背景技术

胶原蛋白是细胞外基质的主要成分，分布于机体的各个器官，是生物体内含量最多、最丰富的蛋白质，约占体内蛋白质总量的25％～30％。胶原蛋白含有大量极性基团，具有表面活性和很好的相容性。胶原蛋白独特的三股螺旋结构，赋予其良好的生物相容性、生物可降解性、低抗原性等特性。此外，胶原分子能够激活内源性凝血途径，且含有的羟基脯氨酸又是一种起修复作用的氨基酸，当胶原与血小板作用后，能快速引起后继的与血液聚集相关联的一系列过程的进行，从而迅速凝血，达到止血效果；同时，胶原蛋白能促进成纤维细胞的增殖和分化，诱导成核细胞、淋巴细胞、巨噬细胞的聚集，促进毛细血管生长，进而加速组织再生和创面愈合。因此，胶原蛋白已在医药、生物组织工程等方面展现出极大潜力。

明胶是胶原的温和断裂降解产物，是分子量分布很宽的多肽分子混合物，分子量一般在几万至十几万。明胶为亲水性胶体，是一种两性电解质。明胶分子结构上有大量的羟基，另外还有许多羧基和氨基；明胶含有内氨酸、甘氨酸、脯氨酸及羟脯氨酸等人体所需的18种氨基酸，但明胶属于营养不完全蛋白质，缺乏某些必需氨基酸，尤其是色氨酸。明胶易溶于温水，其溶解度与凝固温度相差很小，易受水份、温度、湿度的影响而变质。正因为明胶的凝胶性、固水性、粘合性和溶解性等多种特性，使其医药行业有广泛的用途。

现有的止血胶原蛋白海绵多用牛跟腱为原料进行提取胶原蛋白或明胶后，结合其他高分子生物材料、高分子聚合物或制备技术进行胶原蛋白海绵的制备，品种单一，因此开发效果更佳的多样的止血胶原蛋白海绵具有重要的意义。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的首要目的在于提供一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵，该胶原蛋白海绵能加速出血部位的止血速度，并且在组织愈合的同时逐渐降解，降解产物通过促进细胞增殖等作用，起到促进创伤修复的作用。

本发明的另一目的在于提供上述具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵的应用。

为了实现本发明的目的，本发明采用的技术方案如下：

一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵，其特征在于，所述具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵是由牦牛皮胶原蛋白及牦牛皮明胶构成；

进一步，所述具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵是由混合溶液冷冻干燥或直接干燥得到的具有三维多孔结构的支架；

进一步，所述具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵是由混合溶液冷冻干燥或直接干燥得到的具有三维多孔结构的支架，所述支架具备以下特点：质量≥5mg/cm³，拉力≥65g/cm²，吸水量不小于吸水前自身重量的17倍，总蛋白含量≥总重量的65％(m/m)，厚度为1～6毫米。

一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将新鲜的青藏高原牦牛Wild Yak的牦牛皮清洗干净，然后剔除牦牛毛，剪成长5～8cm、宽5～8cm小块，并除去表层和皮下组织层，得到的牦牛皮真皮层小块；

(2)I型胶原制备：步骤(1)得到的牦牛皮真皮层小块进一步切碎，长1～3mm，宽1～3mm。0.5mol·L-1醋酸溶液，料液比1:10～30，牦牛皮:胃蛋白酶重量比100:1.0～2.5。低温搅拌提取16～36h，过滤、盐析、纯化，冷冻干燥后备用；

(3)明胶制备：步骤(1)得到的牦牛皮真皮层小块直接进行水提，得到提取液，该提取液利用具有一定大小孔径的微孔滤膜过滤后，得到上下层不同分子量范围的提取液，将所述上层提取液浓缩，冷冻干燥后备用；

(4)将步骤(2)和步骤(3)所得的样品按照质量比1:1～4混合后加蒸馏水低温溶解，浓缩料液比至1:0.6～0.2；

(5)将步骤(4)所得的浓缩溶液真空或离心脱气后倒入磨具，将模具于-80℃冷冻4～8h后冷冻干燥，得到所述的快速止血牦牛皮胶原蛋白海绵。

优选的，步骤(2)所述的加NaCl进行盐析，NaCl最终浓度至3～5mol/L，之后的反复盐析用梯度2.5～0.9mol/L逐级盐析；

优选的，步骤(3)所述牦牛皮提取的明胶的分子量10～180kDa；