[发明专利]一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵，其特征在于，所述具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵是由牦牛皮胶原蛋白及牦牛皮明胶构成。

2.根据权利要求1所述的一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵，其特征在于，所述具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵是由混合溶液冷冻干燥或直接干燥得到的具有三维多孔结构的支架。

3.根据权利要求1所述的一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵，其特征在于，所述具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵是由混合溶液冷冻干燥或直接干燥得到的具有三维多孔结构的支架，所述支架具备以下特点：质量体积比(密度)≥5mg/cm3，拉力≥65g/cm2，吸水量不小于吸水前自身重量的17倍，总蛋白含量≥总重量的65％(m/m)，厚度为1～6毫米。

4.根据权利要求1所述的一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将新鲜的青藏高原牦牛Wild Yak的牦牛皮清洗干净，然后剔除牦牛毛，剪成长5～8cm、宽5～8cm小块，并除去表层和皮下组织层，得到的牦牛皮真皮层小块；

(2)I型胶原制备：步骤(1)得到的牦牛皮真皮层小块进一步切碎，长1～3mm，宽1～3mm。0.5mol·L-1醋酸溶液，料液比1:10～30，牦牛皮:胃蛋白酶重量比100:1.0～2.5。低温搅拌提取16～36h，过滤、盐析、纯化，冷冻干燥后备用；

(3)明胶制备：步骤(1)得到的牦牛皮真皮层小块直接进行水提，得到提取液，该提取液利用具有一定大小孔径的微孔滤膜过滤后，得到上下层不同分子量范围的提取液，将所述上层提取液浓缩，冷冻干燥后备用；

(4)将步骤(2)和步骤(3)所得的样品按照质量比1:1～4混合后加蒸馏水低温溶解，浓缩料液比至1:0.6～0.2；

(5)将步骤(4)所得的浓缩溶液真空或离心脱气后倒入磨具，将模具于-80℃冷冻4～8h后冷冻干燥，得到所述的快速止血牦牛皮胶原蛋白海绵。

5.根据权利要求4所述的一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的加NaCl进行盐析，NaCl最终浓度至3～5mol/L，之后的反复盐析用梯度2.5～0.9mol/L逐级盐析。

6.根据权利要求4所述的一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述牦牛皮提取的明胶的分子量10～180kDa，所述水提的条件是指料液比为1：10～20，温度为65～100℃，提取次数1～4次，每次3～8小时，所述的微孔滤膜是指滤过分子量为10kDa孔径的滤膜至孔径为0.1μm的滤膜。

7.根据权利要求4所述的一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，步骤(3)(4)所述的浓缩的条件是低温常压浓缩，温度30～40℃或压力为0.09MPa，真空度为500～600mmHg的加压浓缩。

8.根据权利要求4所述的一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，步骤(2)(3)(5)所述的冷冻干燥是在-10～-80℃冷冻4～8h，然后在真空、冷阱温度-60℃下冷冻干燥16～20h。

9.根据权利要求4所述的一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的冷冻干燥是在-20～-80℃冷冻5～7h，然后在真空、冷阱温度-60℃下冷冻干燥16～20h。

10.根据权利要求1所述一种具有快速止血作用的牦牛皮胶原蛋白海绵在外表皮出血的止血，内脏组织大量出血的止血，神经外科，骨科，妇科及普外科手术中止血和创伤修复应用。