[发明专利]一种樱桃酵素脂质体的制备方法

说明书

一种樱桃酵素脂质体的制备方法，其主要是先由安琪酵母菌、植物乳杆菌和奥尔兰醋杆菌共同发酵樱桃，之后对发酵液进行多次快速反复冻结和融解，以破坏其中发酵菌的细胞壁，使细胞内酶类溶出，制得樱桃酵素；再以磷脂和豆甾醇作为膜材料，通过薄膜水化法包载樱桃酵素，表面使用聚乙二醇修饰，最终制得樱桃酵素脂质体，该纳米微囊可以增加酵素体内循环时间，并实现酵素的缓释。本发明的樱桃酵素脂质体，利于人体的消化吸收，同时通过脂质体的包载，避免酵素酶被胃液破坏，保持结构和活性的稳定、增加其在体内的循环时间，促进人体对樱桃酵素的利用率。

技术领域

本发明属于保健食品技术领域，特别涉及一种樱桃酵素脂质体及其制备方法。

背景技术

随着人们逐渐开始注重养生调理，酵素产品受到人们越来越多的关注。酵素又称酶，合理适量地补充酶对于人体健康十分有益。然而传统酵素类产品以口服为主要摄取方式，经过胃液的消化作用，酶的结构遭到破坏，活性受到抑制，丧失保健养生功效。

因此研发一种有利于酵素口服吸收的制剂，以保存其有益功能十分必要。如发明专利《一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法》中所描述使用脂质体包载有效成分避免胃液的消化作用破坏功能性因子。脂质体是一种由天然可食用原料通过自组装形成的纳米微囊，作为食品营养成分的理想载体，具有良好的生物相容性以及可生物降解等特性；能够提高包载成分的稳定性、生物利用度并延长体内循环时间。

常规脂质体使用磷脂与胆固醇作为膜材料，过多的胆固醇摄入会引发一系列健康问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种不含胆固醇、利于人体消化吸收、能够保持酵素酶结构和活性的稳定、延长其在体内的循环时间的樱桃酵素脂质体的制备方法。本发明主要是将三种菌混合发酵得到的樱桃酵素包载于磷脂和豆甾醇自组装形成的脂质体中。

本发明的制备方法如下：

一、混合菌发酵制备樱桃酵素

原料按质量计量，包括以下组分：安琪酵母菌1-5份，植物乳杆菌2-8份，奥尔兰醋杆菌1-3份，樱桃5000-7000份，白砂糖1000-6000份。

所述安琪酵母菌菌数大于1-2×10⁹个/g，植物乳杆菌菌数大于2×10⁸个/g，奥尔兰醋杆菌菌数大于2×10⁸个/g。

(1)将樱桃洗净晾干去核去蒂，将发酵容器洗净灭菌烘干；

(2)按照上述比例，将三株菌种按质量浓度0.05-0.2g/mL分别溶于樱桃汁，25-35℃恒温水浴中均速搅拌10-40min以活化菌株；

(3)将樱桃和白砂糖装入发酵容器中反复堆叠至容器体积的70-75％，加入容器体积15-20％的无菌水，将步骤(2)中活化后的三种菌液加入到瓶中，于28-35℃环境中密封保存；

(4)15-20天后将瓶中发酵液取出过滤除去滤渣；

(5)将发酵液在干冰-水体系和35℃温水中循环浸泡2-5次，使发酵液经历迅速冻结和融解的循环，以破坏发酵菌和樱桃的细胞壁结构，获取其内酶类；

(6)对步骤(5)制得的酵素采用0.45μm无菌微孔滤膜过滤除菌，于4℃保存。

二、樱桃酵素脂质体的制备

原料按质量计量，包括以下组分：磷脂40-60份，豆甾醇4-7份，聚乙二醇3-8份，樱桃酵素6000-15000份。

(1)将磷脂、豆甾醇、聚乙二醇溶于无水乙醇中，在温度30-60℃，转速30-80rpm条件下，真空旋蒸1.5-6h除去无水乙醇，在瓶壁形成透明脂质薄膜；