[发明专利]一种樱桃酵素脂质体的制备方法

权利要求书

1.一种樱桃酵素脂质体的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

一、混合菌发酵制备樱桃酵素

原料按质量计量，包括以下组分：安琪酵母菌1-5份，植物乳杆菌2-8份，奥尔兰醋杆菌1-3份，樱桃5000-7000份，白砂糖1000-6000份；

(1)将樱桃洗净晾干去核去蒂，将发酵容器洗净灭菌烘干；

(2)按照比例，将三株菌种按质量浓度0.05-0.2g/mL分别溶于樱桃汁，25-35℃恒温水浴中均速搅拌10-40min以活化菌株；

(3)将樱桃和白砂糖装入发酵容器中反复堆叠至容器体积的70-75％，加入容器体积15-20％的无菌水，将步骤(2)中活化后的三种菌液加入到瓶中，于28-35℃环境中密封保存；

(4)15-20天后将瓶中发酵液取出过滤除去滤渣；

(5)将发酵液在干冰-水体系和35℃温水中循环浸泡2-5次，使发酵液经历迅速冻结和融解的循环，以破坏发酵菌和樱桃的细胞壁结构，获取其内酶类；

(6)对步骤(5)制得的酵素采用0.45μm无菌微孔滤膜过滤除菌，于4℃保存；

二、樱桃酵素脂质体的制备

原料按质量计量，包括以下组分：磷脂40-60份，豆甾醇4-7份，聚乙二醇3-8份，樱桃酵素6000-15000份；

(1)将磷脂、豆甾醇、聚乙二醇溶于无水乙醇中，在温度30-60℃，转速30-80rpm条件下，真空旋蒸1.5-6h除去无水乙醇，在瓶壁形成透明脂质薄膜；

(2)将步骤一制得的樱桃酵素倒入到步骤(1)的脂质薄膜中，在温度40-50℃，转速50-120rpm条件下，常压旋转水化0.5-2h，形成脂质体乳浊液；

(3)对步骤(2)得到的乳浊液进行超声处理，使用水浴超声或者冰浴探头超声，水浴超声100％功率，时间为15-30min；冰浴探头超声功率为300-600w，超声模式为工作2-5秒/间歇2-5秒，时间为5-15min，得到脂质体溶液；

(4)将步骤(3)得到的脂质体溶液经过无菌微孔滤膜除菌后，在-20℃冷冻长期保存，或者放置4℃冰箱随时饮用。

2.根据权利要求1所述的樱桃酵素脂质体的制备方法，其特征在于：所述安琪酵母菌数大于1-2×10⁹个/g、植物乳杆菌菌数大于2×10⁸个/g、奥尔兰醋杆菌菌数大于2×10⁸个/g。