[发明专利]副溶血性弧菌的核酸适配体及其应用以及检测副溶血性弧菌的试剂盒和方法

说明书

本发明提供了一种副溶血性弧菌的核酸适配体及其应用以及检测副溶血性弧菌的试剂盒和方法，涉及生物传感器的技术领域。本发明提供的核酸适配体，能够特异性的识别副溶血性弧菌，能够用于副溶血性弧菌的检测；本发明提供的试剂盒，具有很高的灵敏度与特异性，操作简单，检测快速，结果肉眼可见，适合所有实验室进行推广，无需专业培训即可实现对副溶血性弧菌的实时现场分析。

技术领域

本发明涉及生物传感器技术领域，尤其是涉及一种副溶血性弧菌的核酸适配体及其应用以及检测副溶血性弧菌的试剂盒和方法。

背景技术

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,简称V.p.)是一种嗜盐性的革兰氏阴性菌，属于弧菌科弧菌属，此菌适应性强，可生长于温度5～44℃，pH4.8～11.0，盐度1～8％范围的环境中。副溶血性弧菌广泛分布于近海岸海水及生长其中的水产品中，例如虾、蟹、扇贝等。目前常规的检测方法已难以满足对副溶血性弧菌现场快速检测的实际需求。

最常用的是微生物培养法，根据副溶血性弧菌的生理生化特性进行鉴定，一般需要增菌培养、分离培养、生化实验、血清学鉴定等步骤。这些方法结果稳定性好且被认可为检测的国标方法，但是实验操作复杂、耗时长，从采样到鉴定需要3～5天，而且灵敏度和特异性不高，难以用于现场分析。仪器分析法主要利用气相色谱法、高效液相色谱法等，主要根据副溶血性弧菌的化学组成或产生的代谢产物的特征谱以进行检测。此类方法结果可靠且灵敏度高，但需要繁琐的样品前处理过程、精密昂贵的仪器和经验丰富的操作人员，不利于在基层推广。使用分子生物学方法进行检测，包括最常用的聚合酶链式反应PCR、环介导等温扩增LAMP等，通过扩增副溶血性弧菌的特异表达基因进行检测。这种方法大大缩短了检测时间和简化了检测程序，但是前期需要提取细菌总DNA或RNA，而且存在较高的假阳性率。免疫学方法是一种基于抗原和抗体之间特异性结合的原理实现检测的，常用的有酶联免疫吸附法ELISA、酶联荧光分析法ELFA、电化学分析法等。免疫学检测方法具有特异性强、灵敏度高、易于观察等优点，但制备抗体的周期长、成本高，且不适合长期稳定保存，因而限制了他们的广泛应用。

核酸适配体(Aptamer)是一段寡核苷酸，通过体外人工进化程序(Systematicevolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选得到，它可以高效、特异地结合各种配体，如蛋白、小分子化合物、细胞等，特异性如同抗体一样。由于它的易合成、易储存和易修饰等优点，在医学诊断治疗、药物分子设计及分析检测中具有良好的应用前景。但是，如何将核酸适配体更好的应用于副溶血性弧菌的检测之中，需要进一步的探索和研究。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供副溶血性弧菌的核酸适配体，本发明的第二个目的在于提供副溶血性弧菌的核酸适配体的应用，本发明的第三个目的在于提供用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，本发明的第四个目的在于提供检测副溶血性弧菌的方法，以缓解现有技术中存在的副溶血性弧菌检测灵敏度低、操作不便的技术问题。

本发明提供了一种副溶血性弧菌的核酸适配体，包括：所述核酸适配体具有如SEQID NO.1所示的序列：

GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA(SEQ ID NO.1)。

另外，本发明还提供了所述的核酸适配体在下述I或者II中的应用：

I、检测副溶血性弧菌；

II、制备用于检测副溶血性弧菌的试剂盒。

另外，本发明还提供了一种用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述的核酸适配体、与所述核酸适配体不完全互补的cDNA、能够自组装成长链的两个发卡序列H1和H2以及高铁血红素；

所述cDNA能够触发所述H1和H2的自组装；