[发明专利]副溶血性弧菌的核酸适配体及其应用以及检测副溶血性弧菌的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括核酸适配体、与所述核酸适配体不完全互补的cDNA、能够自组装成长链的两个发卡序列H1和H2、以及高铁血红素；

所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO.1所示：

GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA(SEQ ID NO.1)；

所述cDNA的序列如SEQ ID NO.2所示：

TAGACGCCACCCACACC(SEQ ID NO.2)；

所述cDNA能够触发所述H1和H2的自组装；

所述H1和H2的3’端和5’端分别具有能够形成G-四聚体结构的部分前体核苷酸序列；

所述H1的序列如SEQ ID NO.3所示：

AGGGCGGGGGTGTGGGGGCGTCTAACCCACACCTTCTTGTTGGGT(SEQ ID NO.3)；

所述H2的序列如SEQ ID NO.4所示：

TGGGTAGACGCCACCCACACCAAGAAGACGGTGTGGGTGGGTAGGGCGGG(SEQ ID NO.4)；

所述cDNA与所述H1的5’端互补；所述H1的3’端与所述H2的5’端互补，所述H2的3’端与所述H1的5’端互补；

所述H1和H2自组装成长链后，位于所述H1 3’端的部分前体核苷酸序列，和位于所述H25’端的部分前体核苷酸序列，能够形成完整的G-四聚体结构；位于所述H2 3’端的部分前体核苷酸序列，和位于所述H1 5’端的部分前体核苷酸序列，能够形成完整的G-四聚体结构；

所述完整的G-四聚体结构结合所述高铁血红素后，能够形成具有催化活性的DNAzyme。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括能够被所述DNAzyme催化的底物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述底物为四甲基联苯胺。

4.一种非诊断目的检测检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，所述方法包括：

当不存在副溶血性弧菌时，核酸适配体与cDNA不完全互补，所述cDNA被封闭，H1为发卡结构，H2为发卡结构；

当存在副溶血性弧菌存在的情况下，副溶血性弧菌与所述核酸适配体结合，所述cDNA被暴露，被暴露的所述cDNA与所述H1的5’端互补配对，所述H1的发卡结构被打开，3’端暴露；所述H1的3’端与所述H2的5’端互补配对，所述H2的发卡结构被打开，3’端暴露；所述H2的3’端与所述H1的5’端互补配对，所述H1的发卡结构被打开，3’端暴露；依次自组装成长链；

所述H1的3’端与所述H2的5’端互补配对后，位于所述H1 3’端的能够形成G-四聚体结构的部分前体核苷酸序列，和位于所述H2 5’端的能够形成G-四聚体结构的部分前体核苷酸序列，能够形成完整的G-四聚体结构；位于所述H2 3’端的能够形成G-四聚体结构的部分前体核苷酸序列，和位于所述H1 5’端的能够形成G-四聚体结构的部分前体核苷酸序列，能够形成完整的G-四聚体结构；

所述完整的G-四聚体结构结合高铁血红素后，能够形成具有催化活性的DNAzyme，所述DNAzyme能够催化底物颜色的变化，以实现对所述副溶血性弧菌的检测；

所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO.1所示：

GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA(SEQ ID NO.1)；

所述cDNA的序列如SEQ ID NO.2所示：

TAGACGCCACCCACACC(SEQ ID NO.2)；

所述H1的序列如SEQ ID NO.3所示：

AGGGCGGGGGTGTGGGGGCGTCTAACCCACACCTTCTTGTTGGGT(SEQ ID NO.3)；

所述H2的序列如SEQ ID NO.4所示：

TGGGTAGACGCCACCCACACCAAGAAGACGGTGTGGGTGGGTAGGGCGGG(SEQ ID NO.4)。