[发明专利]一种基于硫磺素T的免疫分析方法有效
申请号: | 201710329519.8 | 申请日: | 2017-05-11 |
公开(公告)号: | CN108872571B | 公开(公告)日: | 2023-05-23 |
发明(设计)人: | 蒋兴宇;刘野;王云云 | 申请(专利权)人: | 国家纳米科学中心 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569 |
代理公司: | 北京市英智伟诚知识产权代理事务所(普通合伙) 11521 | 代理人: | 刘丹妮 |
地址: | 100190 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 硫磺 免疫 分析 方法 | ||
1.一种用于实施基于硫磺素T的免疫分析方法的组合产品,其特征在于,所述组合产品包括:包被于酶标板的肺炎支原体菌体抗原、洗涤液、封闭液、标准品、碱性磷酸酶标记的抗肺炎支原体抗体的抗体、多肽前体和硫磺素T;所述多肽前体的氨基酸序列为甘氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸。
2.根据权利要求1所述的组合产品,其特征在于,所述组合产品为试剂盒形式,其中各包含成分为各自独立存在的试剂状态。
3.根据权利要求1所述的组合产品,其特征在于,所述组合产品还包括紫外灯。
4.根据权利要求1所述的组合产品,其特征在于,所述方法包括:使用碱性磷酸酶作为标记酶,使用多肽前体作为反应底物,将多肽前体与硫磺素T混合,通过检测所述硫磺素T的荧光来检测样本中肺炎支原体抗体MP-IgM的存在或浓度。
5.根据权利要求4所述的组合产品,其特征在于,所述方法进一步包括:
(1)包被抗原:以相应的稀释浓度包被肺炎支原体菌体抗原于酶标板孔中,并封膜封板,静置;
(2)洗板:加入Tris-HCl洗涤液洗板,并翻转酶标板置于吸水纸上并滤去水分;
(3)封闭:加封闭液,室温封闭;
(4)洗板,重复步骤2;
(5)加入标准品和待测血清,室温孵育;
(6)洗板,重复步骤2;
(7)用稀释液将碱性磷酸酶标记的抗肺炎支原体抗体的抗体稀释至工作浓度,封板,室温孵育;
(8)洗板,重复步骤2;
(9)加入多肽前体和硫磺素T混合溶液,室温避光孵育;和
(10)检测:测定每孔硫磺素T紫外和荧光光谱的变化。
6.根据权利要求5所述的组合产品,其特征在于,步骤(1)中包被液为血清白蛋白溶液,肺炎支原体菌体抗原浓度为0.1~20mg/mL,注入量为100μl/孔,静置条件为4℃过夜或37℃静置2小时。
7.根据权利要求6所述的组合产品,其特征在于,步骤(1)中所述肺炎支原体菌体抗原浓度为0.1~10mg/mL。
8.根据权利要求5所述的组合产品,其特征在于,步骤(1)中所述肺炎支原体菌体抗原浓度为1mg/mL。
9.根据权利要求5所述的组合产品,其特征在于,步骤(2)中所述的Tris-HCl洗涤液浓度为0.05μmol/L;每孔注入量为100μl,洗板次数为3次,每次间隔1~3分钟。
10.根据权利要求5所述的组合产品,其特征在于,步骤(3)中所述的封闭液为血清白蛋白溶液,封闭液的注入量为200μl/孔,封闭时间为0~5小时。
11.根据权利要求10所述的组合产品,其特征在于,步骤(3)中封闭时间为0~2小时。
12.根据权利要求11所述的组合产品,其特征在于,步骤(3)中封闭时间为1小时。
13.根据权利要求5所述的组合产品,其特征在于,步骤(5)中所述的标准品为肺炎支原体菌体抗原标准品;标准品的注入量为0.1mg,待测血清的注入量为1ul,孵育时间为0~5小时。
14.根据权利要求13所述的组合产品,其特征在于,步骤(5)中所述的标准品为碱式磷酸酶标记的鼠抗人MP-IgM;孵育时间为0~2小时。
15.根据权利要求14所述的组合产品,其特征在于,步骤(5)中孵育时间为1小时。
16.根据权利要求5所述的组合产品,其特征在于,步骤(7)中所述的稀释液为磷酸缓冲溶液,pH为7.0~7.5,每孔注入量为100μl,孵育时间为0~5小时。
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