[发明专利]小麦光腥黑粉菌原生质体的制备方法

权利要求书

1.小麦光腥黑粉菌原生质体的制备与再生方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)菌丝培养：将小麦光腥黑粉菌的冬孢子在水琼脂培养基中培养，温度为16℃，相对湿度为80％；培养6-9天后，用灭菌蒸馏水冲洗下来，收集菌液，离心去上清，得到菌丝；

(2)细胞壁裂解：以1.2mol/L氯化钾溶液作为渗透压稳定剂，配制混合酶液，加入菌丝中，28℃振荡酶解1.5-2.5h，即得到小麦光腥黑粉菌原生质体；所述混合酶液与所述菌丝的配比为20ml：1g；所述混合酶液由质量百分比浓度为1.5％的崩溃酶、1.5％的溶壁酶和1.5％的蜗牛酶组成；

(3)原生质体再生：将得到的原生质体用1.2mol/L的氯化钾溶液重新悬浮后，涂布在固体TB3培养基上，16℃培养4天。

2.根据权利要求1所述的小麦光腥黑粉菌原生质体的制备与再生方法，其特征在于：所述水琼脂培养基的制备方法为：称取20g琼脂粉，加水定容到1L，高压蒸汽灭菌。

3.根据权利要求1所述的小麦光腥黑粉菌原生质体的制备与再生方法，其特征在于：所述小麦光腥黑粉菌冬孢子在水琼脂培养基中培养7天。

4.根据权利要求1所述的小麦光腥黑粉菌原生质体的制备与再生方法，其特征在于：所述28℃振荡酶解的时间为2h。

5.根据权利要求1所述的小麦光腥黑粉菌原生质体的制备与再生方法，其特征在于，所述振荡酶解在180r/min的转速下进行。

6.根据权利要求1所述的小麦光腥黑粉菌原生质体的制备与再生方法，其特征在于，所述TB3培养基的配方为：酵母提取物3g/L，酸水解酪蛋白3g/L，蔗糖200g/L，酵母粉10g/L。